放射性碘标记

在RIA中，标记抗原质量的优劣，直接影响测定结果，必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原，并保持免疫活性不受丧失。

一、同位素的选择

　　同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量，这种测量较灵敏而方便，故多用放射性同位素。标记抗原，常用的放射性同位素有 3 H、 14 C、 131 I和 125 I等。

在使用上各有其优缺点，可根据所进行的放射免疫分析的类型特点，标记物制备和供应情况以及实验室设备条件等作适当的选择（表8-1）。

大多数抗原分子中都含有C、H等原子，所以用 14 C或 3 H标记不改变抗原的结构及其免疫学活性，且 14 C、 3 H半衰期长，所标记的抗原长时间放置后仍可使用，这都是其优点。

14 C或 3 H标记的不足之处是操作较繁琐，并难以获得高比放射性的标记物； 3 H及 14 C放出的都是弱β射线，需用较昂贵的液体闪烁计数器方能获得较高效率的测量，且测定操作也较麻烦。但某些抗原用放射性碘标记容易丧失免疫化学或生物学活性者，则仍以采用 3 H或 14 C标记物为佳。

表8-1 标记抗原常用的放射性同位素及其性质

放射性元素	半衰期	射线种类及能量（百万电子伏特）
β	γ
14 C	5720年	0.155	－
3 H	12.5年	0.0189	－
125 I	60天	－	0．035
131 I	8.05天	0.608，0.335，0.250	0.364，0.637，0.722

　　大多数抗原分子中是不含碘的,引入碘原子就改变了抗原的分子结构，往往容易损伤抗原的免疫化学活性；且放射性碘的半衰期较短，标记物放置后因衰变使放射性降低，因而需要经常制备标记物或要求能定期提供放射性碘标记都能适用，放射性碘放出γ—射线，用一般晶体闪烁计数器就能获得较高效率而精确的测量，测量操作也很简单。由于这些突出的优点，目前在放射免疫分析中，使用放射性碘标记物最多。

　　从应用角度来看， 131 I和 125 I又各有其优缺点，可根据实验的要求、仪器的条件和放射性碘制剂的规格等条件合理选用。

但相对而言， 125 I有较多的优点，一是半衰期适中，允许标记化合物的商品化及贮存应用一段时间；二是它只发射28keV能量的X射线和35keV能量的γ射线，而无β粒子，因而辐射自分解少，标记化合物有足够的稳定性。

放射性碘适用于放射免疫分析许多对象（包括蛋白质、肽类、固醇类、核酸类以及环型核苷酸衍生物等）的标记，且操作简单，一般实验室都不难做到。

二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记

　　要制备高比度、高纯度与免疫化学活性好的标记物，首先要有高纯度、良好免疫活性的抗原。用作放射标记加网免疫分析的特异性，所以若用纯度不高的抗原作标记，则标记后必须采取适当的步骤除去杂质，以获得高纯度的标记物。

标记对象的纯化应尽量采用温和的方法，否则在纯化操作中已受潜在性损伤的蛋白质（这时表面上活性可能还是良好的），再经标记反应时所受的损伤，活性就会显著降低，影响以后的放射分析结果。

有了好的纯抗原，还要采用适当方法加以标记，尽量获取高比放射性、而又能保持良好的特异免疫化学活性的标记物。这些都是放射免疫分析能取得高特异性和高灵敏度的关键问题。

　　多肽激素与蛋白质多用碘标记，最常用的是 125 I。碘化反应的基本过程如下：通过氧化剂的作用，使碘化物（ 125 I - ）氧化成的碘分子（ 125 I 2 ），再与多肽激素、蛋白质分子中的酪氨酸残基发生碘化作用。

所以不管采用哪一种放射性碘标记法，标记的化合物内部必须有碘原子可结合的基团，即结构上要含有酪胺基或组织胺残基。凡蛋白质、肽类等抗原，在结构上含有上述基团的可直接用放射性碘进行标记。如不含上述基团的，放射性碘无法标记，必须在这些化合物的结构上连接上述基团后才能进行碘标记。

　　因此影响蛋白质、多肽碘化效率的因素，主要决定于蛋白质、多肽分子中酪氨酸残基的数量及它们在分子结构中暴露的程度；此外，碘化物的用量、反应条件（pH、温度、反应时间等）及所用氧化剂的性质等也有影响。

常用的标记方法有：

1.放射性碘标记：氯胺T法

2.放射性碘标记：乳过氧化物酶法（LPO）

3.放射性碘标记：Iodogen碘化法

4.放射性碘标记：酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法