葡萄糖-6-磷酸酶组织化学染色法
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葡萄糖
-6-
磷酸酶组织化学染色法
葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6―phosphatase，G-6―P)定位于肝、肾、肠黏膜的微体及内质网内。主要有两方面的生理功能：一方面通过水解葡萄糖-6-磷酸释放葡萄糖来控制葡萄糖释放人血的量；另一方面，在一定条件下通过其磷酸转移酶活性合成葡萄糖-6-磷酸。
糖尿病患者血糖浓度增高的同时，伴有葡萄糖-6-磷酸酶的磷酸转移酶活性增高，其作用是取代肝内的葡萄糖激酶，使葡萄糖转向糖原合成。
铅法：葡萄糖-6-磷酸水解后所释放出磷酸，为硝酸铅所捕获，经硫化铵处理，最终反应产物为颗粒状的硫化铅沉淀。反应通式如下：
葡萄糖―6―磷酸钠+H2
O
葡萄糖
-6-
磷酸酶
葡萄糖+磷酸 Pb(NO3
)2
Pb3
(PO4
)2
(NH4
)2
S
PbS↓
1)孵育液配制(新鲜配制)
0．125％葡萄糖―6―磷酸钠 4ml
0．2mol/LTris-顺丁烯二酸盐缓冲液(pH 7．4) 4ml
2％Ph(N03 )2 (2．5％) 0.6ml
蒸馏水 1．4ml
充分混合后使用
2)染色程序：
①新鲜组织冰冻切片；
②10％福尔马林固定5分钟后水洗；
③切片入孵育液中，37℃孵育20分钟水洗；
④人1％硫化铵水溶液中1分钟水冲洗；
⑤3％福尔马林后固定10分钟；
⑥甘油明胶封固。
3)结果：
酶活性处显棕色。
4)对照实验：
①除去底物；
②以F―甘油磷酸钠代替底物；
③以0．01mol/L氟化钠作为抑制剂。
