原理
材料与仪器
己糖激酶
三乙醇胺-HCl NaOH D-葡萄糖 ATP MgCl2 NADP 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
分光光度计
三乙醇胺-HCl NaOH D-葡萄糖 ATP MgCl2 NADP 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 的实验混合物
0.01 ml 己糖激酶
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值上升。ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
计算
注意事项
常见问题
试剂:
100 mmol/L 三乙醇胺-HCl/NaOH,pH 7.6(三乙醇胺-HCl,用 NaOH 调节)
1.0 mol/L D-葡萄糖(Mr=180.2;18 g 溶于 100 ml 水中)
0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADP(二钠盐,Mr=787.4;79 mg 溶于 10 ml 水中)
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH,商品为 100~500 U/mg,应该准备约 5U/0.1 ml 的稀释液)
己糖激酶(HK,约 200U/ml)
来源:丁香实验