捕获ELISA法

第1节- 试剂

1.1涂层缓冲液

PBS（137 mM氯化钠，2.7 mM的氯化钾，8.1 mM的磷酸氢二钠，1.5 mM磷酸二氢钾）

1.2封闭液

5％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）

1.3稀释剂

2％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）

1.4柠檬酸缓冲液

3.65克柠檬酸，4.76克磷酸氢二钠，溶解于500毫升双蒸水

1.5兔抗GST抗体

兔抗GST抗体

1.6 HRP结合山羊抗兔IgG（H + L）

山羊抗兔IgG（H + L），結合过氧化物酶

第2节- 分析方法

注：以下方法是一个指南，用户需要确定自己的最佳实验条件以获取最好的成果。

2.1经由加入具有抗原特异性的抗体到适当的孔（1微克/孔）以加入捕获抗体，浓度应为10微克/毫升于涂层缓冲液中，量应为100μL/孔。※捕获抗体应该是纯化的抗体。

2.2在4℃下孵育孔盘过夜。

2.3加入250μl封闭液到每个孔中。

2.4孵育孔盘于室温下1小时。

2.5清空孔盘，用PBST（0.05％Tween-20）洗涤孔盘一次。

2.6如果待测物为：

A，重组蛋白-以稀释剂稀释待测物至100毫微克，30毫微克，10毫微克，3纳克，1纳克，0.3毫微克，0.1纳克和0.03纳克/毫升。

B，转染裂解液– 以连续稀释倍数进行待测物稀释，以确定可以合适标准曲线的适当稀释倍数。通常使用3X，10X，30X，100X，300X，1000X，3000X在这个步骤。

2.7待测物添加到适当的孔中。

2.8孵育盘于室温下2小时。

2.9清空孔盘，然后用PBST（0.05％Tween-20）洗涤孔盘三次。

2.10加入检测抗体加入标记特异性的兔抗GST抗体的适当的孔中（2.5微克/毫升，100 μL/孔）。

2.11孵育孔盘于室温下2小时。

2.12清空孔盘，然后用PBST（0.05％Tween-20）洗涤孔盘三次

2.13加入第二抗体的方式为加入HRP结合的山羊抗兔IgG（H + L）于适当的孔中。

2.14孵育孔盘于室温下1小时。

2.15用PBST（0.05％Tween-20）洗涤孔盘五次，。

2.16加入入150微升底物（OPD，400微克/毫升，0.03％过氧化氢，柠檬酸盐缓冲液）

2.17在室温下孵育30分钟。

2.18读取450nm的吸光度。