荧光抗体的质量鉴定与保存

荧光抗体的质量通常用抗体效价和结合比率（F/P比值）来表示。

1、抗体效价：一般用琼脂双向扩散法测定。中央孔内加抗原（1 mg/ml），抗体稀释度在1:16-1:32呈阳性者较为理想。

2、荧光素（F）与蛋白质（P）结合比率（F/P比值）法

F/P比值系指荧光素与抗体蛋白的克分子比值，是标记抗体质量鉴定的重要指标之一。该比值以1-2（抗球蛋白荧光抗体）或略高于2（抗菌荧光抗体）为宜，否则非特异性染色增强。若荧光素为TRITC，F/P比值在2.1-9.4之间均可用，但以数值较低者为佳。

试剂

1. 0.01mol/L pH7.2 PBS

2. 牛血清白蛋白（BSA）

3. 0.025mol/L pH9.0 CB

方法

1. 将FITC用少量CB溶解后，再用0.01mol/L pH7.2 PBS 稀释至100ml，作为原液；

2. 用PBS配成0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0 ……10.0mg/ml，于490nm测定吸光度；

3. 将BSA用凯氏定氮法测得蛋白含量，分别用0.01mol/L pH7.2 PBS配成0.1、0.2、0.3……1.5mg/ml，于280 nm测定吸光度；

4. 以横坐标示FITC量（mg/ml）或BSA含量（mg/ml），纵坐标示相应的吸光度，分别绘制FITC和BSA蛋白含量的标准曲线；

5. 于490nm或280nm分别测定标记抗体的吸光度。查标准曲线即可得出标记物中荧光素量和抗体蛋白质量；

6. 计算F/P比值：

F/P比值=2.87×OD495nm/(OD280nm-0.35×OD495nm)

如用TRITC标记抗体，则按下式计算：

F/P比值= OD515nm/OD280nm

荧光抗体的保存 经鉴定合格的荧光抗体，可加入0.01%硫柳汞或0.1%NaN3 防腐，小量分装（0.5ml/支），置0-4℃可保存1年；-20℃可保存2-3年，但取出后应快速融化，避免反复冻融；冷冻干燥后可保存较长时间。