一支尼可刹米
通常20-40ug,后期看结果调整
bamboopiggy
一般20-40ug就够了,太多了反而不好。
Gx41
30-60ug,根据目标蛋白量调节
dxy_6adps4f2
一般来说根据之前BCA等方法测定的蛋白质浓度,大约蛋白20μg左右就好了
whilt-shirt
一般在30ug左右,根据后期实验结果调整上样量
丁香一方
根据你做的蛋白表达量多少选择
总的来说根据你的预实验结果定不要怕尝试,上多少量不要紧关键是能得到漂亮的条带!
一般50-100μg差不多了
DAB显色要50-100μg,用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg,ecl法至少20pg
balalaLy
上样量一般是总蛋白20ng左右,表达比较低的蛋白需要上调总蛋白量
火星人YIWY
我提的是动物组织里头的蛋白,定量为7.5ug/ul,一般上样6-7ul,上样蛋白量40-50ug
申东熙老伯
WB的上样量一般没有明确规定,可以根据蛋白浓度计算上样量,也可以先做预实验,每个孔上样10微升根据趋势再加减。
府宅
根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg,ecl法至少20pg。我也用组织作过western,蛋白浓度的确很高。
通常上50-100ug足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小,可用裂解液稀释蛋白使总上样体积在10ul即可
dxy_gwrp7ndq
这要根据你做的蛋白表达量多少,一般是用DAB显色要50-100μg,用ecl曝光上样量为20-40μg。
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