DYCZ一28A、28B、28C、28D、29、30型夹芯式垂直电泳槽
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一、组成部件
(一)装有铂金丝的贮液槽一对,配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。
(二)凹型橡胶框,配有玻璃板,可分别制作厚度为lmm、1.5mm的凝胶板,操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。
(三)样品孔模具(梳子)用于电泳加样。
(四)固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对,28D、30型为5对。
(五)橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口;中等长度的两根用于连接电极缓;中液的流出口;最短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。
(六)导线1付。
二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框,必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
(二)组装电泳槽
A、
1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中,然后将贮液框仰放在桌上。
2、左手拿凹型槽橡胶模框,右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。
3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上,其下缘必须对齐贮液槽框下缘。
4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合,并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。
5、装上四只螺母,拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀,最好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。
6、将电泳槽垂直竖起,放在桌上,带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端),带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端),在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10%琼脂沿长玻璃板下端灌入,为防止留存气泡,可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。
B、也可将槽垂直竖起,将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中,对称拧紧螺丝后,用琼脂封底边。
1、先灌分离胶,待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水,夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。
2、用细头滴管吸取胶液,沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡,可稍拾起另一端(气泡往高处走),不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处,轻轻加少许水,双手轻轻将梳子插入,待胶凝后就可形成凹形加样孔。
3、为防止漏胶,在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水,但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。
4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折射率不同的亮区。
(四)加样
1、松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子,放掉槽内的蒸馏水,待水流完后,再夹紧夹子。
2、双手轻轻取出样品梳子,即可看到界线清楚的加样孔,将孔中水分吸去(注意千万不要碰坏孔沿的字面)。
3、在上、下贮液槽中加入缓;中液,液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。
4、用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内(注意加样动作要轻,针头不能碰坏胶面)。
(五)电泳
一贮液槽导线与电泳仪的负极相连,下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误,方可按照所要求的电压电流进行电泳。
(六)取出胶板
电泳结束,旋松螺母,取出胶框,剥出玻璃板,在两块玻璃板下角空隙内,用刀片背面轻轻撬动,即可将胶面与一块玻璃板分开,将有胶板的玻璃板平放在桌上,双手轻轻沿凝胶底将胶片托起,放在大培养皿中染色,胶板经漂洗、脱色后即可看到清晰的分离条带。
注:DYCZ—28B、29型夹芯式电泳槽使用方法与此相同。DYCZ—28C型、28D型和30型电泳槽使用方法也与此相同,因是制作两块胶板,故实际形成三个贮液槽。请注意在操作时两个胶室的短玻璃板都要向里,中间为负极,两边为正极。
注意:可作两块胶的电泳槽,在作一块胶时,应将三头导线都插在电泳槽上,以免放在桌上误碰。