制胶（用于垂直电泳或水平电泳）
最新修订时间：
材料与仪器
丙烯酰胺单体贮液 磷酸缓冲液贮液 咪唑缓冲液贮液 过硫酸铵 浓缩胶缓冲液贮液 分离胶缓冲液贮液 SDS TEMED
步骤
SDS 电泳的制胶方法与 “垂直平板电泳的制胶” 和 “水平平板电泳的制胶” 所述的常规聚丙烯酰胺凝胶的灌注方法基本相同，只是在 SDS 电泳制胶时单体贮液不需要抽气，以免产生泡沫，且聚合后的凝胶在室温下，而不是在 4℃ 放置过夜，这样既可使凝胶充分 聚合，以提高电泳的分辨率，又防止 SDS 在凝胶中结晶。自制的 SDS 凝胶最多可在室温下保存 4 天。因为 SDS 的高 pH 会使丙烯酰胺水解。如果需要长期保存，最好选用 pH 6.7 的 Tris-醋酸缓冲液。
不管是垂直电泳，还是水平电泳，SDS 连续电泳用的凝胶灌注方法十分简便，请参阅 “制胶” 。表 5.4 为凝胶配方，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
11.1 g 丙烯酰胺 + 0.3 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml, 过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种丙烯酰胺单体及溶液是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 磷酸缓冲液贮液（0.2 mol/L，pH 7.1 )
19.5 g NaH2PO4·2H2O + 129.0 g Na2HPO4·12H2O + 5 g SDS，用双蒸水溶解到 2.5 L，检査 pH。
3. 咪唑缓冲液贮液（0.1 mol/L，pH 7.0 )
17.0 g 咪唑 + 5 g SDS + 1.5 L 双蒸水，用稀磷酸调至 pH 7。用双蒸水稀释至 2.5 L，再检査 pH。
4. 10% 过硫酸铵
0.1 g 过硫酸铵 + 1 ml 双蒸水。使用前新鲜配制。
在不连续电泳系统中，LaemmLi 使用的 Tris-甘氨酸缓冲液仍然是现在通常使用的缓冲系统。表 5.5 为凝胶配方，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解， 搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml，过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种单体和溶液都是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 浓缩胶缓冲液贮液（1 mol/L Tris-HCl，pH 6.8)
6.06 g Tris 溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调节 pH 至 6.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分离胶缓冲液贮液（1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8)
9.08 g Tris 溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调节 pH 至 8.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 10% SDS
25 g SDS，用双蒸水溶解至 250 ml。室温保存。
5. 10% 过硫酸铵
0.1 g 过硫酸铵 + 1 ml 双蒸水。使用前新鲜配制。
6. 10% TEMED
0.1 ml TEMED + 0.9 ml 双蒸水
灌注垂直电泳用的凝胶必须按 “垂直平板电泳的制胶” 中所述的方法，先灌注分离胶，加保护层，聚合后再灌注浓缩胶，并插入合适的梳子。
灌注水平电泳用的凝胶可以先灌注浓缩胶，接着灌注分离胶，所以在浓缩胶中应加适量的 87% 甘油，见表 5.6。灌注方法请参阅 “水平平板电泳的制胶” 。
1980 年 Gorg 等介绍薄层聚丙烯酰胺小孔梯度凝胶 SDS 电泳。由于小孔梯度凝胶的分子筛效应以及甘油黏度减小了电泳中的扩散，即使对宽范围分子质量的复杂样品也能很好地分离并精确地计算其亚基分子质量。
小孔梯度凝胶的灌注方法参见 “水平平板电泳的制胶" 。凝胶配方见表 5.7，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解, 搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml, 过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种单体和溶液都是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 浓缩胶缓冲液贮液（0.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 6.8 )
3.03 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 叠代钠溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调至 pH 6.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分离胶緩冲液贮液（1.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 8.8)
9.08 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 叠代钠溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调至 pH 8.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 40% 过硫酸铵
400 mg 过硫酸铵溶在 1 ml 双蒸水中，使用前新鲜配置。
不管是垂直电泳，还是水平电泳，SDS 连续电泳用的凝胶灌注方法十分简便，请参阅 “制胶” 。表 5.4 为凝胶配方，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
11.1 g 丙烯酰胺 + 0.3 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml, 过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种丙烯酰胺单体及溶液是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 磷酸缓冲液贮液（0.2 mol/L，pH 7.1 )
19.5 g NaH2PO4·2H2O + 129.0 g Na2HPO4·12H2O + 5 g SDS，用双蒸水溶解到 2.5 L，检査 pH。
3. 咪唑缓冲液贮液（0.1 mol/L，pH 7.0 )
17.0 g 咪唑 + 5 g SDS + 1.5 L 双蒸水，用稀磷酸调至 pH 7。用双蒸水稀释至 2.5 L，再检査 pH。
4. 10% 过硫酸铵
0.1 g 过硫酸铵 + 1 ml 双蒸水。使用前新鲜配制。
在不连续电泳系统中，LaemmLi 使用的 Tris-甘氨酸缓冲液仍然是现在通常使用的缓冲系统。表 5.5 为凝胶配方，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解， 搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml，过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种单体和溶液都是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 浓缩胶缓冲液贮液（1 mol/L Tris-HCl，pH 6.8)
6.06 g Tris 溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调节 pH 至 6.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分离胶缓冲液贮液（1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8)
9.08 g Tris 溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调节 pH 至 8.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 10% SDS
25 g SDS，用双蒸水溶解至 250 ml。室温保存。
5. 10% 过硫酸铵
0.1 g 过硫酸铵 + 1 ml 双蒸水。使用前新鲜配制。
6. 10% TEMED
0.1 ml TEMED + 0.9 ml 双蒸水
灌注垂直电泳用的凝胶必须按 “垂直平板电泳的制胶” 中所述的方法，先灌注分离胶，加保护层，聚合后再灌注浓缩胶，并插入合适的梳子。
灌注水平电泳用的凝胶可以先灌注浓缩胶，接着灌注分离胶，所以在浓缩胶中应加适量的 87% 甘油，见表 5.6。灌注方法请参阅 “水平平板电泳的制胶” 。
1980 年 Gorg 等介绍薄层聚丙烯酰胺小孔梯度凝胶 SDS 电泳。由于小孔梯度凝胶的分子筛效应以及甘油黏度减小了电泳中的扩散，即使对宽范围分子质量的复杂样品也能很好地分离并精确地计算其亚基分子质量。
小孔梯度凝胶的灌注方法参见 “水平平板电泳的制胶" 。凝胶配方见表 5.7，贮液配置如下：
1. 丙烯酰胺单体贮液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉双丙烯酰胺，先用 35 ml 双蒸水溶解, 搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至 50 ml, 过滤。用棕色瓶可在 4℃ 保存一个月。两种单体和溶液都是中枢神经毒物，要小心操作。
2. 浓缩胶缓冲液贮液（0.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 6.8 )
3.03 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 叠代钠溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调至 pH 6.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分离胶緩冲液贮液（1.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 8.8)
9.08 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 叠代钠溶解在 40 ml 双蒸水中，用 4 mol/L 盐酸调至 pH 8.8，再用双蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 40% 过硫酸铵
400 mg 过硫酸铵溶在 1 ml 双蒸水中，使用前新鲜配置。
来源：丁香实验
