电泳
最新修订时间:
材料与仪器
丙烯酰胺单体贮液 磷酸缓冲液贮液 咪唑缓冲液贮液 过硫酸铵 浓缩胶缓冲液贮液 分离胶缓冲液贮液 SDS TEMED
步骤
一、垂直电泳
SDS 和常规聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的方法基本相同。将缓冲液贮液稀释一倍便为连续电泳的电极缓冲液。不连续 SDS 电泳的电极缓冲液常用 Tris-甘氨酸系统(0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L 甘氨酸,0.1% SDS,pH 8.3 )。
二、水平电泳
和常规聚丙烯酰胺凝胶电泳一样,SDS 水平电泳目前也有三种方式,即经典的搭接滤纸桥的方式和二种半干方式。前者操作麻烦,电泳时间长。半干技术在保证分辨率的前提下,电泳时间只需 1 小时(分离距离 8 cm),且节省材料,操作简便。
搭滤纸桥的 SDS 水平电泳方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法相同。连续和不连续电泳的电极缓冲液和上述的 SDS 垂直电泳相同。电泳可采用恒电流方式,加样时用低电流,以使样品分子可顺利地进入凝胶,见表 5.8。
小孔梯度聚丙烯酰胺凝胶 SDS 电泳的电极缓冲液也为 0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L 甘氨酸,0.1% SDS,pH 8.3。电泳条件则常采用恒功率方式,见表 5.9。
SDS 和常规聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的方法基本相同。将缓冲液贮液稀释一倍便为连续电泳的电极缓冲液。不连续 SDS 电泳的电极缓冲液常用 Tris-甘氨酸系统(0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L 甘氨酸,0.1% SDS,pH 8.3 )。
二、水平电泳
和常规聚丙烯酰胺凝胶电泳一样,SDS 水平电泳目前也有三种方式,即经典的搭接滤纸桥的方式和二种半干方式。前者操作麻烦,电泳时间长。半干技术在保证分辨率的前提下,电泳时间只需 1 小时(分离距离 8 cm),且节省材料,操作简便。
搭滤纸桥的 SDS 水平电泳方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法相同。连续和不连续电泳的电极缓冲液和上述的 SDS 垂直电泳相同。电泳可采用恒电流方式,加样时用低电流,以使样品分子可顺利地进入凝胶,见表 5.8。
小孔梯度聚丙烯酰胺凝胶 SDS 电泳的电极缓冲液也为 0.025 mol/L Tris,0.192 mol/L 甘氨酸,0.1% SDS,pH 8.3。电泳条件则常采用恒功率方式,见表 5.9。
来源:丁香实验