维生素A的测定:比色法

实验原理

维生素A（视黄醇）属于脂溶性维生素，在氯仿溶液中能与三氯化锑生成不稳定的蓝色物质，此反应称为Carr-price反应，可用于维生素A 的定性鉴定和定量测定，所生成的颜色的深浅与溶液中维生素A的量成正比。在一定时间内可用分光光度计 在620nm波长下测定其吸光度。

试剂和器材

一、试剂

无水硫酸钠；醋酸酐；无水氯仿；乙醚。

25％三氯化锑－氯仿溶液：称取干燥的三氯化锑25g溶于100mL无数氯仿中，棕色瓶避光储存。

维生素A标准液：准确称取标准维生素A，置于容量瓶中，用氯仿溶解，配成100IU/mL 的标准液。

二、材料

鱼肝油。

三、器材

试管1.5×15cm（×10）;移液管10mL（×1）, 1 mL（×11）；容量瓶25mL（×10），带塞锥形瓶250mL（×1），研钵，分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

将维生素A标准液用氯仿稀释成不同浓度的标准系列（如10，20，30，40，50，60，70，80，90，100IU/mL）。再取相同数量比色杯，顺次加入1mL氯仿和1mL标准液，各管加入醋酸酐一滴，制成标准比色列。

用氯仿于620nm波长处调零。将标准比色列按顺序移至光路前，迅速加入9mL三氯化锑－氯仿溶液，在6秒内测光吸收度。以吸光度为纵坐标，以维生素含量为横坐标，绘制标准曲线图。

二、样品测定

采用研磨法测维生素A的含量。

研磨：精确称取2－5g样品，置于研钵内，加入3－5倍样品重量的无水硫酸钠，仔细研磨至样品中的水分完全被吸收。

提取：小心将上述研磨物移入带塞的锥形瓶中，准确加入50－100mL乙醚，盖好塞子，用力振摇2分钟，使样品种维生素A 溶入乙醚中，将锥形瓶置于冰水中1－2h, 直至乙醚液澄清为止。

浓缩：取澄清乙醚提取液2－5mL, 放入比色管中，在70－80℃水浴中抽气蒸干，立即加入氯仿1mL 溶解残渣，再加1滴醋酸酐和9mL 三氯化锑，混匀，在6秒内测其吸光值。

据所测吸光值从标准曲线上查处待测管中维生素A的国际单位数，再根据稀释关系求出样品中维生素A的含量。

注意事项

(1) 维生素A极易被光线破坏，实验操作应在微弱光线下进行。

定量测定维生素A所用的试剂和器材必须绝对干燥。微量水分可使三氯化锑，不再与维生素A反应，并出现混浊。在试管中加入1－2滴醋酸酐可除去微量吸入的水分。

(2) 氯仿应不含分解物，否则会破坏维生素A。