原理
磺胺类药物及苯环上有游离氨基的化合物在酸性溶液中与亚硝酸钠进行重氮化反应，生成重氮盐，此外在碱性溶液中与酚类物质(如麝香草酚)发生偶联反应，生成橙红色偶氮化合物，可在560 nm波长下进行比色测定磺胺嘧啶的浓度。
材料与仪器
家兔
肝素 磺胺嘧啶钠 三氯醋酸 亚硝酸钠 盐酸 戊巴比妥钠 麝香草酚 肝素 生理盐水
试管 离心管 注射器 吸管 离心机 分光光度计
肝素 磺胺嘧啶钠 三氯醋酸 亚硝酸钠 盐酸 戊巴比妥钠 麝香草酚 肝素 生理盐水
试管 离心管 注射器 吸管 离心机 分光光度计
步骤
1. 麻醉并固定：取健康家兔一只，称重， 3%戊巴比妥钠1 ml /kg，耳缘静脉麻醉，麻醉后，仰卧位固定在兔台上。
2. 手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg，结扎远心端，近心端用动脉夹夹住，两端之间留2 cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口，然后从向心方向插入塑料管，推进1～2 cm结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。
3. 取空白血：取1 ml，置于干燥的含肝素的试管中，振摇。
4. 给药取血：从耳缘静脉注射20％磺胺嘧啶钠溶液（1.0 ml/kg），给药后2. 5. 10. 20和30 分钟分别取血1 ml，置于干燥的含肝素的试管中，振摇。
5. 去蛋白：从每份血样中分别取血0.2 ml 置于离心管中，加入5％三氯醋酸4.6 ml充分振摇后放置数分钟，然后放入离心机内离心，使血中蛋白质沉淀完全。
6. 重氮化及偶合化：取上清液1.5 ml依次加入2N盐酸0.25 ml和5％亚硝酸钠0.3 ml，充分振摇后再加入麝香草酚0.3 ml振摇后呈橙红色。
7. 测定：将上清液倒入比色皿中内，放入分光光度计内，以给药前血样作空白对照，于560 nm波长处进行比色测定，记录其光密度值。
8. 制作标准曲线（由老师率先绘制）
9. 将给药后将不同时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，其时量关系常呈直线，
该直线的方程式为logCt=lgCO-k/2.303·t
药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位：h或min)
用FX-3600P计算器，采用直线回归的运算程序，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
2. 手术：纵向切开颈部正中皮肤，分离颈下组织，找到气管，在气管一侧分离出颈总动脉，从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg，结扎远心端，近心端用动脉夹夹住，两端之间留2 cm 距离，用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口，然后从向心方向插入塑料管，推进1～2 cm结扎并固定，塑料管用止血钳夹住，松开动脉夹。
3. 取空白血：取1 ml，置于干燥的含肝素的试管中，振摇。
4. 给药取血：从耳缘静脉注射20％磺胺嘧啶钠溶液（1.0 ml/kg），给药后2. 5. 10. 20和30 分钟分别取血1 ml，置于干燥的含肝素的试管中，振摇。
5. 去蛋白：从每份血样中分别取血0.2 ml 置于离心管中，加入5％三氯醋酸4.6 ml充分振摇后放置数分钟，然后放入离心机内离心，使血中蛋白质沉淀完全。
6. 重氮化及偶合化：取上清液1.5 ml依次加入2N盐酸0.25 ml和5％亚硝酸钠0.3 ml，充分振摇后再加入麝香草酚0.3 ml振摇后呈橙红色。
7. 测定：将上清液倒入比色皿中内，放入分光光度计内，以给药前血样作空白对照，于560 nm波长处进行比色测定，记录其光密度值。
8. 制作标准曲线（由老师率先绘制）
9. 将给药后将不同时间的光密度输入计算器，计算出不同时间酚红的血浆浓度。以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。以血浆药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，其时量关系常呈直线，
该直线的方程式为logCt=lgCO-k/2.303·t
药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位：h或min)
用FX-3600P计算器，采用直线回归的运算程序，计算出不同时间酚红的血浆浓度。
注意事项
1. 分离颈总动脉时，要把神经分离开，结扎的时候不能结扎神经。
2. 用取液器取上清液的时候，小心谨慎，不要取出血。
3. 离心时应将取血试管重量平衡后对称置入。
4. 禁止用手接触比色皿的透光面，若有液体，用擦镜纸擦拭干净。
2. 用取液器取上清液的时候，小心谨慎，不要取出血。
3. 离心时应将取血试管重量平衡后对称置入。
4. 禁止用手接触比色皿的透光面，若有液体，用擦镜纸擦拭干净。
来源：丁香实验
