XTT比色法

XTT比色法有Scudiero等首次采用，用于检测细胞增殖。XTT是异种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物，当XTT与电子偶合剂共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

[试剂及材料]

(1)XTT：用60℃预热培养液配制成6.6mmol/L，过滤除菌，现配现用。

(2)吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)：用PBS配制成220mmol/L，4℃避光保存20天。

(3) XTT/PMS：XTT与PMS按1：1混合(临用时混合)。

[操作方法]

(1)刺激增殖反应同前；

(2)于终止培养前2h，每孔加入XTT/PMS 20μl，混匀后再培养2h；

(3)在酶标仪上450nm处测定光吸光度，参考波长为655nm；

[结果分析]

计算SI：SI＝试验孔OD均值/对照孔OD均值

[注意事项]

(1)丝裂原的质量和活性是测定淋巴细胞增殖反应的关键因素。不同厂家的产品，质量、活性不同，其使用的最佳刺激量也不同，因而在实验前，应事先确定其最佳刺激量。

(2)检测T细胞增殖反应，丝裂原用PHA或ConA；B细胞增殖反应用LPS或SPA；T、B细胞增殖反应则用PWM。

(3)增殖反应的细胞应保持高活性，一般应≥95％。应用单抗分离制备的反应细胞因保存剂（如NaN3 ）或抗体的直接作用可抑制细胞的增殖。此外，增殖细胞的浓度过高或过低均不利于细胞生长。

(4)细胞培养液应无菌、无支原体污染，特别是小牛血清应加热灭活补体，避免LPS或其他能促进细胞增殖物的污染。因此，实验前应选择本底低的小牛血清。用人"AB"型血清或自体血清也应加热灭活补体。