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比色法

相关实验:磺胺药的药代动力学参数测算实验

最新修订时间:

原理

磺胺类药物能与某些试剂发生反应生成有色物质,通过比色可以对其血浓度进行定量检测。酸性环境下,磺胺类药物苯环上的氨基(-NH2)离子化生成铵类(-NH3+)化合物,与亚硝酸钠发生重氮化反应,生成重氮盐(-N=N+-)。这种化合物在525 nm波长下比色,其光密度与磺胺类药物的浓度呈正比。

药代动力学:研究药物在体内转运和转化的动力学规律。通过观察用药后血药浓度的变化(时量曲线),研究药物从血浆中消除的速率,并以房室模型描述其规律,指导临床用药、调整用药剂量和给药间隔时间。

材料与仪器

兔子
三氯醋酸 亚硝酸钠 麝香草酚 磺胺嘧啶
分光光度计

步骤

1.  麻醉,分离颈动脉。耳缘静脉注射肝素抗凝后,颈动脉插管,取动脉血备用。

2.  取血:先取空白动脉血。然后给家兔耳缘静脉注射磺胺嘧啶(SD,0.3 g),分别于注射后0、3、5、15、30、45、60、90 min 时取动脉血。

3.  测定血药浓度:严格按照下表中的顺序加药:

 

 
根据标准管的药物浓度及其光密度值,可计算出样品管内的药物浓度。公式如下:

OD 样/OD 标 = C 样/C 标

将所测得的血药浓度值与时间通过计算机进行曲线拟合,得到药时曲线,表达公式如下:

Ct = Ae-αt + Be-βt

其中,
Ct:时间t后的血药浓度
A:分布开始时的血药浓度;
α:分布速率常数;
B:消除开始时的血药浓度;
β:消除速率常数。

在半对数坐标纸上以时间(t)为横坐标,实测的光密度值换算而得的血药浓度的对数为纵坐标,绘制时量曲线图。 

注意事项

1.  加取血样的吸量管为同一只,因此应先取空白血样,分别加到对照管和标准管中后,再从注射后90min 时的血样开始取起,然后是注射后60、45、30、15、5、3、0 min 的血样。

2.  每只试管内,先加三氯醋酸,再加入血样,加完血样后立即振荡,否则会很快发生凝固,影响结果的准确性。

3.  显色剂的顺序一定不能错:亚硝酸钠→麝香草酚。

4.  SD的血药浓度单位为μg/ml。

来源:丁香实验

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