细胞实验原创经验

丁香园网友zlawrance的观点为：

（1）细胞冻存管一般有1.5-2ml左右体积，原则上可以存放1.5ml充满均匀悬浮细胞的冻存液，一些人喜欢灌注1-1.5ml冻存液冻存，这实际上并不好。原因如下：冻存液冻存需要一段时间，如果这段时间冻存管倾斜，液体容易流到管口，很容易在后续的操作中造成污染。建议0.5-1ml之间即可。

（2）许多教科书推荐细胞解冻用37度水，本人发现温度可以适当提高，39度也没有问题，虽然只提高了2度，却可以加速细胞解冻的时间。解冻后有提点挺重要，迅速用75%乙醇消毒冻存管管口和双手，然后进入下一步工作，随时别忘无菌操作。

（3）当无菌操作台经常有多人工作时，记住自己用时，尽量把各种实验用物在紫外灯下消毒30-40分钟， 包括枪头，移液器，废液缸等容易忽略的物品。但是，不要让胰酶和培养液处在紫外灯照时下！

（4）准备用实验台时，关掉紫外灯的同时，应打开鼓风机，如果操作太两边都有风机旋钮，应该保持两边风机风速一致，而且应该大于100，以免飞虫进入（当然不能吹灭酒精灯火苗）。最好再用75酒精蘸洁净一次性纸巾擦试所有可以消毒的地方，尤其是工作面。

（5）如果不是通过两个圆孔进入手臂操作，而需要抬高操作台前置玻璃挡板，一般不要超过15厘米，主要目的还是减少污染几率。

丁香园网友wavypeng的观点为：

(1)做实验时保持白大褂的干净.尤其不是通过两个圆孔进入手臂操作的实验台,白大褂的干净整洁(尤其是袖口处)可直接影响到实验的染菌几率.并最好不要把袖子掳起直接进去操作,因为我们皮肤表面可能会有细菌滋生.

(2)保持实验台的干净整洁,尽量保持实验台上所放物品少一些,并且保持实验台里的东西是专台专用.

(3)初学者常常会将瓶口、瓶盖在火上烧灼的时间少一些来减少染菌的几率，其实这样往往会加大染菌的机会。正确的做法是在火上烧灼片刻后（外焰）立即盖上，并保持一定的通气量，水平放置。

丁香园网友seeworld的观点为：

1、冻存管外面用封口膜封上后，最好再用白胶布再封一下。这样可以防止细胞复苏时，封口膜崩裂，水浴箱中的水进入冻存管。

2、水浴箱是个大问题，我们实验室有次细胞很严重的污染事件，哪里都没出问题，后来查了水浴箱中的水，发现了很多大肠杆菌。所以建议水浴箱一定要及时将脏水倒掉，然后用75％酒精擦洗箱内，最后换上蒸馏水。

3、水域温度我觉得39——40度比较好，因为以前我38度复苏时，一般一分钟内不能融化细胞，细胞存活率也不好，而40度时细胞的存活率满高。