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ChIP―GLAS启动子芯片

互联网

1997
ChIP ― GLAS 启动子芯片

基因表达的研究或称mRNA水平分析,是要确定在任何细胞或组织中,一个或多个基因的开启或关闭(基因转录调节)程度,也是对基因在不同条件下和应对各种刺激下如何发挥作用的一种综合分析。DNA微阵列是系统性测定基因表达的关键技术。

然而,当今科学家面临的主要困惑是,传统的DNA微阵列技术主要是检测基因转录产物mRNA,这样目前的DNA微阵列只能研究人基因组总DNA的1. 5%,也就是对应的蛋白编码区。而基因的表达调控是细胞内蛋白与DNA相互作用的结果。

为了更好了解基因组DNA其他区域对基因的表达所起的作用,一些能够系统性测绘和分析基因转录调节元件,如启动子、增强子和沉默子的新技术被开发出来。

这里介绍在全基因组范围内做DNA结合蛋白与DNA相互作用的测绘和分析的DNA微阵列,即美国ASB(AVIVA SystemBiology)公司拥有专利权的GREMATM阵列技术。

h20kGLAC―Chip是首个寡核苷酸DNA微阵列,包含了1.8万个确认的人基因组启动子区,其中约有3 200个基因拥有2个以上的可选启动子区(alternativepromoter)。

ChIP―GLAS启动子芯片由美国ASB公司开发,在染色质免疫沉淀技术的应用中处于领先地位。

该启动子芯片技术是用于检测单个转录因子在细胞中的某一时刻与2万个基因启动子相互作用的情况。通过染色质免疫共沉淀技术和启动于芯片的有机结合,可以确定任何一个特定转录因子的靶基因群。

1.ChIP―GLAS启动子芯片技术的特点

(1)操作简单,成本低。

(2)容易与经典的DNA微阵列芯片技术和结果整合,操作方便,涵盖2万个功能基因的启动子序列,固定在芯片上的每条探针是40 nt的寡核苷酸序列,每个探针对应一个基因。

(3)高通量:一次实验可以完成被检测的转录因子对全基因组范围内的2万个基因的转录调控研究。

(4)高灵敏度和高特异性:与传统ChIP―Chip技术中的标记方法(LM―PCR)不同,本芯片采用了“连接与选择指南”(guided ligationand selection,GLAS)标记技术,使检测灵敏度提高了3个数量级,同时特异性也得到了显著的增强。

(5)严格的质控体系:为了保证实验结果的可靠性,从基因组DNA超声片段的大小到染色质免疫共沉淀的成功与否都有完善的质控措施。

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