体外培养细胞成功率分析
北纳创联
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研究体外培养细胞成功率．主要针对原代培养的动物和人的组织细胞，由于培养的目标细胞很多是成体细胞和分化终末的细胞，缺乏肿瘤细胞无限增值的能力。容易导致培养失败，为了在实验中提高原代培养的成功率，应注意一下几个方面的因素。
一、取材
(一) 细胞的种类
根据实验的目的和要求，尽可能选择具有分裂增殖能力的细胞，如上皮细胞、成纤维细胞等。原代培养肿瘤细胞较正常细胞容易，成功率也较高。
(二) 取材的部位
在实验目的和要求允许的情况下．取材应选用来源充足、方便、材料新鲜无污染，选取细胞容易分离的部位。如血管上皮可以选用肠系膜中动脉、成纤维细胞可以选择肺组织或者皮肤组织等。
(三) 供体的选择
一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。而成年和老年动物的细胞成活率较低。原代分离干细胞和没有增值能力的细胞时，首选动物的胚胎。
有研究表明经组织块法原代培养获得的人牙周膜细胞的成功率不同，12～14 岁组最高，成功率为 66．67％；15～18 岁组次之，成功率为 8．57％；19～28 岁组最低，成功率为 0。
(四) 取材的基本要求
1. 取材的组织最好尽快培养。因故不能即时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或 4℃ 冰箱中。如果组织块很大，应先将其切成 1 cm 以下的小块再低温保存，但时间不能超过 24 h。
2．取材时应严格无菌操作，用无菌包装的器皿或用事先消毒好的，带少许培养液的小瓶等便于携带的物品取材．取材过程中要尽量避免紫外线照射和接触化学试剂如碘、汞等。
从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材时，为减少污染，可用含 500～1000 单位／ml 的青链霉素 BSS 液漂洗 5～10 min，或用 10％ 达克宁注射液冲洗浸泡 10 min 再做培养。
3．取材和原代培养时，要用锋利的器械如刮脸刀片切碎组织．尽可能减少对细胞的机械损伤。
4．对于血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织，取材时要细心除去，修剪和切碎过程中，为避免组织干燥，可将其浸泡于少量培养液中。
5．原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的培养液，最好添加胎牛血清，含量为 10％～20％ 为宜。
6．一般来讲，胚胎组织较成熟个体的组织容易培养，分化底的较分化高的组织容易生长．肿瘤组织较正常组织容易培养。如无特殊要求，可采用易培养的组织进行培养，成功率较高。
7．为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养后与原组织的差异性，原代取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。对组织的来源、部位、包括供体的一般情况要一详细的记录，以备以后查询。
二、细胞分离方法
结构松散的组织细胞可以通过组织块培养法获得原代细胞．但是对于人或动物体内 (或胚胎组织) 由于多种细胞结合紧密．不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖．即使采用 1 mm3 的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须，现有的组织块充分散开．使细胞解离出来。
不同组织细胞使用不同的分离方法成活率也有差别，针对悬浮细胞和实体组织的不声常用的分离方法主要包括离心法、分选液离心法、组织块培养法、机械分散法、消化法等。
三、培养基和培养器材
目前，各大公司都有针对不同原代细胞培养而设计的培养基和专用的培养器材，为有特殊营养需要的细胞以及需要滋养层的细胞提供体外培养的支持，提高我们的培养技术。
