酸化血红蛋白稀释测定法（改良沙利氏法）

[目的与原理]

掌握测定鱼类血红蛋白含量的原理和方法，应用改良沙利氏法测定不同鱼类血红蛋白含量。

本实验是应用比色法测定鱼的血红蛋白量。血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便比色。

但是加入稀盐酸于血液中可使血红蛋白变成不易变色的高铁血红蛋白，这就可以与标准色相比，从而测出其含量。通常以每100ml血液中含血红蛋白克数来表示，正常鱼血红蛋白含量为7—8g。

[实验对象]

鲤、鲫或草鱼。

[试剂与器材]

血红蛋白比色计，血吸管，注射器，凹瓷盘，小试管，试管架，蒸馏水，75%酒精，棉球，0.1mol/L盐酸，蒸馏水，滴管，纱布，抗凝剂（1%肝素钠溶液或10%草酸钾溶液）。

[实验步骤]

1、了解血红蛋白比色计的构成 血红蛋白计主要包括吸血管、比色计和比色管等部件。吸血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10μl、20μl的刻度，尾端连有橡皮头，供吸血用。比色计的两侧，装有标准浓度的高铁血红蛋白溶液，也有用比色玻璃柱（或片）来代替的。

比色管可插在比色计中，与两侧的标准比色柱进行比色。比色管的两侧通常刻有两行刻度。一行为血红蛋白的绝对值，以g计数（每100毫升血液中所含血红蛋白的克数）来表示，刻度范围为2～22。

另一行为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，刻度范围为10%～160%。目前测定常用绝对值来表示。

2、用蒸馏水将比色管洗净，吸血管则依次用蒸馏水，95%酒精和乙醚洗净干燥备用。

3、用滴管加0.1mol/L盐酸4—6滴到刻度比色管内，约加到管下端刻度“2”或“10%”处为止。

4、采血：采血方法见实验49，用吸血管吸血至20μl刻度（要准确）。用绵球仔细将管尖端外面的血拭去.

5、将吸血管中血液轻轻地滴到比色管中盐酸底部，并用上层较清的盐酸溶液反复清洗吸血管3次。使吸血管内的血液完全洗净。切勿带入空气，以至形成气泡影响比色。吸血管尖端残留的液体，应在比色管内壁上沥净。

取出吸血管后，轻轻摇动比色管使血液与盐酸充分混合，静置15分钟使管内的盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高铁血红蛋白。

6、把比色管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。

7、用吸管将蒸馏水逐滴地加入比色管内，每加一滴都应充分混匀并观察比色管内的颜色，直到比色管内溶液的色度和血红蛋白计上标准色度相同时为准，读出管内液面所在的刻度数，（读数应以溶液凹面最低点相一致的刻度为佳）。即为每100ml血液中所含血红蛋白的克数（用g/100ml表示）。

8、实验完毕应将吸血管和比色管洗净，放回盒内。

[方法评估]

采用目视比色法测定血红蛋白含量是比较常用及简便的方法，但此法误差较大，而且同 仪器 的准确度有关。

[应用意义]

血红蛋白含量与年令、性别、性周期、营养状况、活动情况、季节变化等有关，营养不良或长期饥饿可引起血红蛋白量显著降低。

[注意事项]

1、用吸血管吸血过程应仔细、认真，准确把握住吸入的血液量是初学者的一个难点，也是实验结果准确与否的一个关键。

2、血红蛋白吸管很容易被损坏，应妥善爱护。管内有凝血块时不可用金属丝疏通，可浸泡入氨水或45%尿素溶液中，待血块去除后再用水洗净，并按 蒸馏 水→ 95%酒精→ 乙醚的顺序清洗，最后吹干吸管。

3、盐酸浓度不可过稀。血液与盐酸作用时间不可过短，必须在10分钟以上方可稀释比色，否则血红蛋白不能充分转变成高铁血红蛋白。最好在30分钟内比色完毕。

4、滴加 蒸馏 水时，宜少量多次，逐滴加入后混匀比色，以免稀释过度，得不到准确结果。

5、比色应在自然光线下进行，避免在阴暗处或有色灯光下比色，并将比色管刻度转向两侧，以免影响比色效果。