稀释培养法

一、测定方法的选择

1. 直接培养法：此法适用于BOD5 值不超过7mg/l 的水样。

2. 稀释培养法：当耗氧量超过水样中溶解氧时，需用配制的饱和稀释水将水样适当稀释，再测定耗氧量。一般水样BOD5 值在10mg/l 以上的采用此法。

3. 瞬时需氧量：对于含有硫化物、亚硫酸盐、亚铁等还原性无机物的水样，有时需测定瞬时需氧量。一般情况可省去此步骤。

1. 当采用稀释培养法时，要求作稀释水的空白值，同时必须严格控制实验条件。

2. 稀释水水源不同空白值不同。离子交换水易受到树脂床的污染，不宜采用，而一般蒸馏水作为稀释源，20℃BOD5 值可达0.2 mg/L，其空白值可达到规定要求。

3. 采集水样时应充满容器，防止曝气，并密封。0~4℃保存，一般在4 h 内分析。

4. 硝化作用对BOD5 值有影响，细菌利用硝化作用增加了耗氧量，致使BOD 值增高，可以加入一定量的硝化抑制剂，如烯丙基硫脲等，抑制细菌对含氮化合物的硝化作用。

5. 当水样中微生物很少时，应进行接种，所用的标准接种物质是已在20℃条件下贮存了24～36 小时澄清的生活污水。

6. 水样采集后应立即进行测定。在采样和分析样品之间的贮存期，样品有明显的降解，可影响BOD 值。若在15-20℃下放置数小时，可使BOD 的含量减少二分之一；如在冰冻条件下保存3 天时，其BOD 值减少5%。

7. 重金属盐对微生物的生长有抑制作用从而影响BOD 值。这些离子可采用中和、沉淀、离子交换等方法消除。

8. 确定水的稀释倍数。当水中有机物含量高时，首先需测定耗氧量或化学需氧量值再推测出BOD 值，确定稀释倍数。通常地表水（OC﹥5mg/L）以OC/1~3 的商作为水样所需稀释倍数；工业废水以CODCr/4～5 的商作为水样所需稀释倍数。

9. 样品稀释时，水样及稀释水用虹吸管插入容器底部，轻轻流入防止产生气泡。

10. 一般认为稀释过的水样在20℃温度下，经5 天培养后溶解氧减少40～70%较为合适，减少量过多或过少都会带来较大误差。

生化需氧量(Biochemical oxygen demand，简称BOD)是指在有氧的条件下，水中微生物分解有机物的生物化学过程中所需溶解氧的质量浓度，以氧的mg/L 表示。水中有机物含量多，消耗的溶解氧就多，生化需氧量也就高。有机物质的生物化学氧化反应，一般分为两个阶段，第一阶段为碳氢化合物氧化为二氧化碳和水，称为碳化阶段，在20℃以下需20 天，但在20℃时5 天可达68%；第二阶段氨被氧化为亚硝酸盐及硝酸盐，称为硝化阶段，欲达到完全稳定状态，在20℃时需100 天左右，因时间比较长，除长期研究工作外，无实际应用价值。微生物的活动与温度有关，所以测定BOD 时，常以20℃作为测定标准温度。为便于测定，目前国内外普遍以20℃培养5 天所消耗的溶解氧作为指标，简称BOD5。 BOD5 即取一定量水样或稀释水样，在20±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5 值。