PCR产物回收、纯化

一、实验目的

学习使用DNA胶回收试剂盒回收、纯化琼脂糖凝胶中的DNA片段，掌握回收、纯化原理和实验操作。

二、基本原理

DNA片段的回收和纯化是基因工程操作中的一项重要技术，例如可收集特定酶切片段用于克隆或制备探针，回收PCR产物用于再次鉴定等。纯度和回收率是回收实验中两个最重要的技术指标：前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应；后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。

UNIQ-10柱内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。通过Binding Buffer II裂解释放出DNA，然后借助UNIQ-10吸附DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 最后用Elution Buffer、TE或者水洗脱DNA。

2. 台式高速离心机4台（每8人1台）
4. 电子天平1台

6. 移液器16套（每2人1套）

四、实验材料

2. PCR产物（即上次PCR产物电泳实验时割取的胶块）；
4. 1.5ml 离心管 （无菌）；

6. 无菌枪头1ml, 200μL各10支；

五、实验步骤

2. 在上次实验割取的胶块中加入600 μL的Binging Buffer II，置于50-60℃水浴中10min，每2min混匀一次，使胶块彻底熔化。
4. 将熔化的胶溶液转移到套放在2 ml收集管内的UNIQ-10柱中，室温放置2 min。
6. 8000 rpm室温离心1 min，取下UNIQ-10柱，倒掉收集管中的废液。
8. 将UNIQ-10柱放入同一个收集管中，加入500 μL Wash Solution，8000rpm室温离心1min。
10. 重复上一步洗涤一次。
12. 取下UNIQ-10柱，倒掉收集管中的废液，将UNIQ-10柱放回到同一个收集管中，12000 rpm室温离心1 min。
14. 将UNIQ-10柱放入一个新的1.5 ml微量 离心管 中，在柱子膜中央加40ml Elution Buffer（或dd water，pH>7.0），室温或37℃放置2min（55-80℃洗脱效果更好）。
16. 12000rpm室温离心1 min， 离心管 中的液体就是回收产物。