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直接从PCR产物回收纯化DNA (Promega 公司试剂盒)

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1845

1)直接加90-100μl纯化缓冲液于1.5ml离心管,再加入30~300μl PCR反应物,Vortex混合;
2)加入1ml树脂轻轻Vortex 3次,每次间隔1分钟;
3)将取出拉杆的注射器筒(3ml)装在纯化柱上,加入上述DNA与树脂混合液,然后装上拉杆,慢慢将混合液推进纯化柱内;
4)卸下注射器筒,拔出拉杆,再将注射器筒装上纯化柱,加2ml 80%的Isopropanol(异丙醇), 然后装上拉杆,慢慢推出液体以清洗柱子;
5)再次卸下注射器筒,将纯化柱装在1.5ml离心管上,10000g离心2 min,以干燥树脂;
6)再将纯化柱装在一个新的1.5ml离心管上,加30-50μl水或TE缓冲液,1分钟后,10000g离心20秒,溶出DNA片段;
7)移去纯化柱,将纯化出的DNA溶液取出部分用于酶切,其余在-20℃下保存备用
补充几点本人在试验过程中的经验:
1)用50~60度温育过的水洗脱可以提高DNA的回收效率;

2)可适当降低离心的转速,让DNA缓慢的通过纯化柱,这样也可以提高DNA的回收效率。

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