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小鼠α-防御素(α-DF)酶联免疫分析

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2117
试剂盒使用说明:
检测范围:                                                          96T

20pg/ml-480pg/ml

 
使用目的:
 
用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中α-防御素(α-DF)含量。
 
实验原理
 
应用双抗体夹心法测定标本中小鼠α-防御素(α-DF)水平。用纯化的小鼠α-防御素(α-DF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入α-防御素(α-DF),再与HRP标记的α-防御素(α-DF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-防御素(α-DF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠α-防御素(α-DF)浓度。 
 
试剂盒组成 
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 7 终止液 6ml × 1
2 酶标试剂 6ml × 1 8 标准品( 960pg/ml 0.5ml × 1
3 酶标包被板 12 孔× 8 9 标准品稀释液 1.5ml × 1
4 样品稀释液 6ml × 1 10 说明书 1
5 显色剂 A 6ml × 1 11 封板膜 2
6 显色剂 B 6ml × 1/ 12 密封袋 1
 
 
标本要求 
 
1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
操作步骤
1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
480pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
240pg/ml 4 号标准品 150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
120pg/ml 3 号标准品 150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
60pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
30pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
 
 
2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
 
3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
 
4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
 
5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
 
6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
 
7、温育:操作同3。
 
8、洗涤:操作同5。
 
9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
 
10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
 
11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 
操作程序总结:
 
计算
 
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 
 
注意事项
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
 
保存条件及有效期
1、试剂盒保存:2-8℃。
2、有效期:6个月
详细信息请咨询上海劲马生物,电话:13817140470
详情请登录: www.shjmkj.com
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