小鼠α-防御素(α-DF)酶联免疫分析
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试剂盒使用说明：
检测范围：
96T
20pg/ml-480pg/ml
使用目的：
用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中α-防御素(α-DF)含量。
实验原理
应用双抗体夹心法测定标本中小鼠α-防御素(α-DF)水平。用纯化的小鼠α-防御素(α-DF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α-防御素(α-DF)，再与HRP标记的α-防御素(α-DF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-防御素(α-DF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠α-防御素(α-DF)浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml × 1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml × 1 瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml × 1 瓶 | 8 | 标准品（ 960pg/ml ） | 0.5ml × 1 瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12 孔× 8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml × 1 瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml × 1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂 A 液 | 6ml × 1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂 B 液 | 6ml × 1/ 瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
标本要求
1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 480pg/ml | 5 号标准品 | 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
| 240pg/ml | 4 号标准品 | 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
| 120pg/ml | 3 号标准品 | 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
| 60pg/ml | 2 号标准品 | 150μl 的3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
| 30pg/ml | 1 号标准品 | 150μl 的2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1、试剂盒保存：2-8℃。
2、有效期：6个月
详细信息请咨询上海劲马生物，电话：13817140470
详情请登录：
www.shjmkj.com
