LC-MS/MS方法检测动物组织中β-兴奋剂类药物

卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测动物组织中β-兴奋剂类药物的方法公布如下：

1. 适用范围

适用于动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺药物的检测。

2. 提取

将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。

向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2，待净化。

3. 净化

活化/平衡：依次向Welchrom^® P-SCX（60mg/3mL）（上海月旭提供）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L盐酸溶液，流出液弃去；

上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去；

淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去，并将小柱抽干；

洗脱：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃下氮气吹，50%乙腈复溶，过0.22μm滤膜，待分析；

4. 色谱质谱条件

4.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18 液相色谱柱（2.1mundefined 100 mm, 3 μm）（上海月旭提供）

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	95	5
3	95	5
5	45	55
10	45	55
10.1	95	5
15.0	95	5

流动相：
      A：0.1%甲酸水溶液
      B：乙腈
      梯度洗脱
      流速：0.2 mL/min
      进样量： 10 μL
      柱温：35 °C
      运行时间：12 min

4.2 质谱条件

扫描模式：MRM
      离子源：ESI+
      毛细管电离电压：3.20 Kv
      孔电压（cone）：45 V
      电离源温度：100 ℃
      脱溶剂温度：300 ℃
      锥孔气流速：50 L/Hr
      脱溶剂气流速：450 L/Hr

名称	母离子	子离子	孔电压(V)	碰撞电压(eV)	驻留时间（ms）	定量离子对	定性离子对
盐酸克伦特罗	277.2	167.8	20	28	100	-	+
203.0	20	16	200	+	-
莱克多巴胺	302.17	106.8	18	28	100	-	+
164.1	18	14	200	+	-
盐酸克伦特罗-D9	288.2	209.2	22	146	100	+
莱克多巴胺-D3	305.2	167.1	18	14	100	+

5. 结果

5.1 回收率和重现性实验

将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次（样品典型回收率色谱图见附图）。

 

添加水平（μg/kg）
分析物	0.1	0.5	1.0
Recovery (%)	RSD (%)	Recovery (%)	RSD (%)	Recovery (%)	RSD (%)
盐酸克伦特罗	93.8	5.82	89.7	5.92	96.1	3.62
莱克多巴胺	95.3	7.43	103.5	3.42	97.4	4.55

5.2 色谱图
 

左图  猪肌肉中添加0.1 mg/kg 盐酸克伦特罗EIC谱图        右图  猪肌肉中添加0.1 mg/kg 莱克多巴胺EIC谱图

本方法中使用到得耗材：

固相萃取小柱Welchrom^®  P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)（上海月旭提供）
      色谱柱：Ultimate XB-18,5undefined2.1mm，3μm（P/N:Ult3B18205）（上海月旭提供）
      13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜（P/N: WEL-SFNY213022）（上海月旭提供）
      12孔固相萃取装置（WEL-Vac-12）（上海月旭提供）