材料与仪器
酵母
YPD SDS 磷酸钾 Na2CO3 OPNG
水浴锅 培养箱 分光光度计 漩涡混合器 离心机
YPD SDS 磷酸钾 Na2CO3 OPNG
水浴锅 培养箱 分光光度计 漩涡混合器 离心机
步骤
1. 按每一个单酵母菌落接种YPD（或适当）的培养基，挑2~3个含lacZ融合蛋白表达质粒的酵母菌于30℃培养过夜，如果融合蛋白在一个质粒上，那么就在选择该质粒的培养基中培养。
2. 在5 ml 培养基中（或用适当的选择培养基和诱导条件）接种20~50 μl 过夜培养的培养液。培养细胞至对数生长的中期或晚期：丰富培养基，0.5~1×106细胞/ml 或极限培养基， 2~5×107细胞/ml（OD600=0.5~1.0）。
3. 培养液1 100 g 离心5 min 收集细胞，用等体积的Z缓冲液重悬菌体，并置于冰浴中， 检査每份样品的OD600值。
4. 每个样品设二个反应管（每管1 ml）：
（1）100 μl 细胞悬液与900 μl Z缓冲液混合。
（2）50 μl 细胞悬液与950 μl Z缓冲液混合。
（1）100 μl 细胞悬液与900 μl Z缓冲液混合。
（2）50 μl 细胞悬液与950 μl Z缓冲液混合。
5. 在每个样品反应管中，用巴斯德吸管滴加1滴0.1%SDS和2滴氯仿，旋涡振荡10~15 s，在30℃水浴中平衡15 min。
6. 加入0.2 ml 4 mg/ml 的OPNG，在旋涡混合器上振荡5 s，置30℃水浴中，并开始计时。
7. 当溶液变黄（OD420=0.3~0.7）时，加入0.5 ml 1 mol/l Na2CO3中止反应，记录下中止反应的时间。
7. 当溶液变黄（OD420=0.3~0.7）时，加入0.5 ml 1 mol/l Na2CO3中止反应，记录下中止反应的时间。
8. 1 100 g 离心细胞5 min 测定上清的OD420和OD550。
9.按下列公式计算半乳糖苷酶的活性（单位U）
9.按下列公式计算半乳糖苷酶的活性（单位U）
来源：丁香实验
