鉴定分析植物蛋白复合物的蓝绿非变性凝胶电泳
丁香园
2149
1. 前言
蓝绿非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN- PAGE) 最先由 Hermann ScMgger 开发出来，并被用于优化线粒体和细菌的膜结合蛋白质的分析和鉴定。这种方法的最初理念是在电泳之前，先将蛋白复合物与蛋白质染料考马斯亮蓝混合在一起。在中性 pH 点上，考马斯亮蓝是一种带负电荷的分子，这时它可将负电荷引入到蛋白质复合物中。与十二烷基硫酸钠（SDS) 的作用相反，那些负电荷不结合到去折叠或解体的蛋白质复合物上。如果考马斯亮蓝渗透进去的蛋白质组分能在低百分浓度的聚丙烯酰胺凝胶上被分离，那么蛋白复合物的亚基就会在 SDS 存在的情况下，通过第一相的 BN-PAGE 电泳和第二相的 SDS-PAGE 电泳被分离出来。在 2D 凝胶上，蛋白点沿着竖条排列，便于指认这些蛋白复合物。第一相凝胶能分离天然状态下的蛋白质和蛋白复合物，并可用多种 胶内染料染色，BN- PAGE 对分离膜结合蛋白复合物特别有用，因为这些蛋白复合物常常缺乏用电泳方法分离天然蛋白质所必需的内部电荷。制备膜组分样品时，需要在考马斯亮蓝染色前，添加去垢剂来增溶膜蛋白，一般使用与天然蛋白质条件一致的温和的非极性去垢剂。BN-PAGE 也被发现对分离可溶性蛋白质和蛋白复合物很有用。
如今 BN-PAGE 是一种对研究蛋白质组分非常重要的基础生化方法，已在蛋白质组学中广泛应用，其应用范围包括：植物线粒体、质体、细胞质膜、质外体及多种有特定生化特性的组分。BN-PAGE 的科学目的一方面要实现对细胞及亚细胞组分中蛋白复合物的系统分析（图 26-1)，另一方面也要实现对具体蛋白复合物的特殊分析。在对具体蛋白复合物进行特殊分析方面，BN-PAGE 可替代像分析超速离心和凝胶过滤色谱层析这样的分离蛋白复合物的其他生化方法。与这两种方法相比，BNPAGE 具有更高的分辨率。
蓝绿非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN- PAGE) 最先由 Hermann ScMgger 开发出来，并被用于优化线粒体和细菌的膜结合蛋白质的分析和鉴定。这种方法的最初理念是在电泳之前，先将蛋白复合物与蛋白质染料考马斯亮蓝混合在一起。在中性 pH 点上，考马斯亮蓝是一种带负电荷的分子，这时它可将负电荷引入到蛋白质复合物中。与十二烷基硫酸钠（SDS) 的作用相反，那些负电荷不结合到去折叠或解体的蛋白质复合物上。如果考马斯亮蓝渗透进去的蛋白质组分能在低百分浓度的聚丙烯酰胺凝胶上被分离，那么蛋白复合物的亚基就会在 SDS 存在的情况下，通过第一相的 BN-PAGE 电泳和第二相的 SDS-PAGE 电泳被分离出来。在 2D 凝胶上，蛋白点沿着竖条排列，便于指认这些蛋白复合物。第一相凝胶能分离天然状态下的蛋白质和蛋白复合物，并可用多种 胶内染料染色，BN- PAGE 对分离膜结合蛋白复合物特别有用，因为这些蛋白复合物常常缺乏用电泳方法分离天然蛋白质所必需的内部电荷。制备膜组分样品时，需要在考马斯亮蓝染色前，添加去垢剂来增溶膜蛋白，一般使用与天然蛋白质条件一致的温和的非极性去垢剂。BN-PAGE 也被发现对分离可溶性蛋白质和蛋白复合物很有用。
如今 BN-PAGE 是一种对研究蛋白质组分非常重要的基础生化方法，已在蛋白质组学中广泛应用，其应用范围包括：植物线粒体、质体、细胞质膜、质外体及多种有特定生化特性的组分。BN-PAGE 的科学目的一方面要实现对细胞及亚细胞组分中蛋白复合物的系统分析（图 26-1)，另一方面也要实现对具体蛋白复合物的特殊分析。在对具体蛋白复合物进行特殊分析方面，BN-PAGE 可替代像分析超速离心和凝胶过滤色谱层析这样的分离蛋白复合物的其他生化方法。与这两种方法相比，BNPAGE 具有更高的分辨率。
