由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

核心 RNA 聚合酶 核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物 σ32 非变性胶样品缓冲液 储存缓冲液 考马斯亮蓝（CBB) 染色液 脱色液
非变性凝胶电泳装置

材料与设备

核心 RNA 聚合酶

核心 RNA 聚合酶-σ³² 复合物，由免疫亲和柱洗脱所得

σ³²，由 POROS 50S 阳离子交换柱洗脱所得

非变性凝胶电泳装置

试剂

非变性胶样品缓冲液（2X)(同 SDS 样品缓冲液，但不含 SDS。)

储存缓冲液

考马斯亮蓝（CBB) 染色液

脱色液

(配方，见"试剂的配制"，PP.184~189)

操作程序

1) 制备非变性胶（如，4%?12% 胶），带 10 个泳道。
注：有几家制造厂商（如，NOVEX) 出售的供 SDS-PAGE 用的梯度 Tris-甘氨酸小胶 (minigel) 实际上是不含 SDS 的。逋常，电泳过程中 SDS 是从电极液和样品缓冲液进入凝胶的，只要这些缓冲液中不含 SDS, 这些凝胶就能相当容易地以非变性的方式进行电泳。

2) 取各蛋白质样品 1~10ul, 加入 5~9ul 的储存缓冲液中，再加 10~20ul 的 2X 非变性胶样品缓冲液。混匀。建议按下表列出将各样品及其合适的蛋白量。



3) 每孔各加 20ul 样品，跑电泳，CBB 染色后脱色。
注：高效液相色谱 (HPLC) 法中的凝胶排阻色谱法也可用来测定蛋白质大小的不均一性。如本单元方案补充实验一节所述。