靶细胞DNA片段的定量分析与杀伤细胞介导的细胞溶解试验

应用此法可以研究CTL、NK细胞介导的凋亡。通过125 I-UdR和51 Cr双标记细胞，可以同时检测DNA片段和溶解的细胞。

材料及材料

1. 125 I-UdR标记细胞核和51 Cr标记细胞浆的靶细胞：用完全RPMI-1640培养液配成5×104 ～1×105 /ml的细胞悬液；

2. 未标记的CTL；CTL杀伤试验所需其他器材。

操作步骤

1. 将100μl标记靶细胞加入1.5ml的离心管中，与100μl 104 ～105 CTL混合，作为试验组，标为B1，或与100μl完全RPMI-1640培养液混合，作为自发释放管（B2）；

2. 室温下离心1000r/min 5min，以使混合的细胞接触，置37℃温育1～8h；

3. 每管加入800μl冰冷的完全RPMI-1640培养液，室温下1000r/min离心5min；

4. 吸取B1和B2管内的上清液分别置于标有S1（含CTL杀伤靶细胞所释放的51 Cr和125 I-UdR标记的片段DNA）和S2（自发释放）的试管中；

5. 加1ml TTE溶液于B1及B2管以溶解细胞，13，000 × g离心10min，以分离完整的染色质与片段DNA，缓慢移出B1和B2管内的上清液分别置于标有T1和T2的管中（每管均含靶细胞裂解释放的125 I-UdR标记DNA和残留的51 Cr）；

6. 用γ-计数仪分别检测B1，B2，S1，S2，T1，T2各管125 I-UdR和51 Cr的cpm值；

结果分析

按下式计算自发释放和试验组释放的51 Cr百分率（作为靶细胞裂解百分率）和125 I-UdR片段DNA百分率。

根据上式所得数据分别按下式计算出特异性裂解百分比和片段DNA的百分比。

e代表与CTL一起温育的试验值（式③或④），s为与培养液单独温育的自发释放值（式①或式②所得数据）。