半干转印与湿式转印的区别 | WEALTEC 威泰克

刚接触 Western Blot 不久的用户，在选购 WB 设备时，经常会遇到仪器选型的问题：为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择，干式和湿式，那么哪种方法更适合我们呢？这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。

我们一般会优先推荐大家选购 YRDIMES 快速半干转印系统，因为干式转印速度很快（常规转膜 30-60min，快速转膜 7-10min），操作也简单，并且 YRDIMES 快速半干转膜系统性价比非常高，不仅整体仪器采购成本低，并且整个系统采用分体设计：YRDIMES 快速半干转印槽 + ELITE200 高电流电泳仪。

这点区别于市面很多把转印槽和电源做成一体设计的快转系统，为了打包销售，给用户带来额外预算负担。快速半干转膜系统分体设计也就意味着：YRDIMES 半干转印槽部分可以与实验室其他电泳仪兼容，同时，配套的 ELITE 200 高电流电泳仪可以兼容实验室其他电泳或者转印槽，仪器利用率非常高，并且后期维护成本非常低。

YRDIMES 的快转成本也很低，如果需要做7 -10 分钟快速转膜时，只需要单独购买快速缓冲液，而无需每次转膜都购买全套一次性专用耗材包。

大多数实验室需要做转膜的蛋白质都是分子量在 0-200 KD 之间的小蛋白质分子，比如常用的内参 Beta Actin 蛋白质分子量为 42 KD，这些小分子蛋白都适合使用半干转印。

但是有一种情况我们会建议用户考虑湿转，比如大分子量 500 kd 的 Native－Gel 这种转膜，因为半干转膜的特点是大尺寸电极板利用强电场快转，但是蛋白质分子量如果太大，运动速度就会减慢，而半干转膜的缓冲液仅仅是靠着上下滤纸浸润的缓冲液提供离子。

这时候如果转膜需要时间太长，容易出现滤纸和胶块被烤干的情况，导致转膜结果不稳定，如果实验室经常需要转膜这种大分子量蛋白质，但又是希望借用半干转膜技术缩短时间提高效率。

我们建议转膜时选用加厚的滤纸，并且使用新鲜配置的缓冲液，充分浸泡转印体系使用；或者使用 E-Blotter 湿转槽在充足缓冲液条件下用较长时间转膜。

E-Blotter 湿转槽相比半干转印槽购置成本较低，同时因为湿转槽的电极板是铂金丝构成，不是大尺寸整块电极板，所以可以配合功率较低、较为基础通用的ELITE300/300PLUS 电泳仪使用。

湿转（或者叫湿法）的优点是，可以对不论大分子量还是小分子量蛋白质，湿转都能比较稳定地转膜，不足之处在于后期缓冲液消耗较大，转印时间较长，并且需要注意做好降温措施。仅建议仪器购置经费十分有限，或者平时经常需要转膜大分子蛋白质的实验室考虑。

不过，如果实验室仅仅是要添置一套入门级别的WB蛋白电泳转膜系统，V-GES 垂直电泳 + E-Blotter 湿转槽一定是你最优的选择。

湿转是 Western Blot 最传统最稳定的转膜方式，因为湿转是将转印膜与凝胶浸泡在缓冲液中做电转，所以可以用较小的电流在较长的时间中进行转膜，外部配置冰盒或者冰箱甚至可以做隔夜慢速湿转达到最佳转膜效果。

如果同样电场条件下，出现湿转的结果可重现性不强，常见有两方面原因：

1. 转膜时间不长，实验者图省事没有加冰盒做降温，小槽体缓冲液体积太小，温度升高过快导致液体电阻变化过快，电流不稳定波动导致转膜结果变动

2. 有些实验室出于经费考虑，要求循环利用缓冲液，缓冲液多次利用后导致有效离子不足，也会影响结果。

针对市面的小型湿转槽常见的这两个问题，E-Blotter 改用 max. 1450ml 的大缓冲液槽设计，这个容积对于比如 30min左右的短时间转膜，使用刚从冰箱取出的缓冲液，大体积缓冲液本身的比热容完全可以控制温度稳定，不需要额外加冰盒制冷；

而对于需要循环利用缓冲液的实验室来说，足够量的缓冲液体积也能最大限度压榨同体积缓冲液中离子的使用效率。有的用户还是有担心，觉得大体积缓冲液槽是不是还是有点浪费缓冲液？

其实不是，对于希望节省缓冲液的用户，大缓冲液槽的设计允许内部添加足量冰袋冰盒占用体积，在同样缓冲液用量下可以达到更好的控温效果。