如何收集用于western blot的细胞

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问：我现在在养细胞，然后收细胞抽蛋白以及提RNA用，我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞，有具体的流程吗?

我是这样做的：

1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心

2、倒去上清，加1 mlPBS 打匀后转移至1.5 ml EP管

3、离心12000 rpm 2 min (不知道大家这里用多少转速，有讲究吗?)

4、倒去上清，我是将EP管倒置一会，但是EP管里面还是有一些上清，我没有倒干净，请问是不是要倒干净上清啊?因为我暂时还不抽提，离心后EP管是放到-80度冰箱保存的。这个上清对抽蛋白和RNA有影响吗?

问题答复：

收集流程没有什么特殊的，和你写的一样，主要注意以下事项：

1、1 ml的PBS可能溶不了那么多细胞(如果你细胞多的话)，所以建议用3 mlPBS，分两管装，离完心后用Trizol溶解合成一管。

2、离心的速度太大了，细胞会死的，建议800 转，5 分钟，一般的细胞都可以离下来。

3、需要去上清，如果是提RNA就用Trizol溶解合成一管，然后放在-80度冰箱，如果提蛋白就直接将离心后的细胞放在-80度冰箱。上清对于提蛋白和RNA没什么影响。还有一点，提RNA的东西一定要高压，如果是初次做可以用DEPC水泡枪头，可以提高作成功的几率。如果操作严格，可以只把要用的枪头和EP管高压即可。