悬浮细胞培养方法求心得

悬浮细胞一般几天离心一次，觉得好难养啊！求心得？

丁香园网友goingba认为：你养的是什么细胞，原代吗？我觉得悬浮细胞最好养了，不用消化，关于几天离一次心，要看你的细胞生长状态了，我养过血液肿瘤细胞，增值比较快，我一般是第二天半量换液（加等量培养基后一分二），第三天若长得比较满，就离心换液。若你不想每天都去管它，你可以把细胞密度中的相对稀一点（不能太稀，太细了细胞不好好长），可以2-3天换一次液（半量，不用离心），这要看细胞状态，和你试验进度，若你急着用细胞，那就将细胞中密一点，天天换液，用胎牛血清，这样细胞会疯长的。要是比较娇气的细胞，象RPMI-8226，一定要用胎牛血清，2-3天半量换液，依据细胞状态再离心换液，等细胞进入对数生长期了，养起来也就好养了。若是正常人T细胞，也要3-5天换一次液，最好3天的时候加入些新培养基，我曾经有一次1周忘了换液（因为T细胞增殖很慢，或者说在体外不给刺激基本不增殖，所以培养基的颜色不发生改变，但它也消耗营养），最后作流式发现细胞大部分凋亡和死亡了。

我养的是JURKAT,细胞状态不太好，都给他吃20%胎牛血清了，听说这细胞挺好样，可能刚复苏不好养，长得不好啊。

丁香园网友goingba认为：我倒没养过你这株细胞，20%胎牛血清稍微有点高，刚复苏出来细胞状态不太好很正常，这是你换液不要太勤，你可以刚种的时候加的培养基少一点，往后几天，每天加一点新鲜的进去。这个时候一点要注意你的培养的放置的时间，若在4度超过了2周，一定要加L-谷氨酰胺，我有一会就是刚开始细胞老是长的不太好，后来加了点谷氨酰胺，状态立马变了！也许我的细胞是赶巧了，马上要好了正碰上我加谷氨酰胺，你的若实在长不好，也可以试一试！