流式细胞术数据处理与分析

1. 单参数直方图单参数直方图是一维数据用得最多的图形，可用来进行定性分析和定量分析。横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，其单位用“道数”（channel）表示，横坐标可以是线性的，也可以是对数的。纵坐标通常代表细胞出现的频率或相对细胞数。下面以研究细胞周期为例说明如何分析单参数直方图所表达的信息。

单参数直方图

经DNA特异性染料（如P1）染色的细胞群体，通过流式细胞仪测量区受激光照射后发出特异性荧光，在一定条件下，荧光强度与细胞内的DNA含量成正比，DNA含量高的细胞发射的荧光强，反之则弱。

DNA含量与细胞数目的关系，即2N（2倍体）代表GO/G1期细胞，4N（4倍体）代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是典型的以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图。通过上述信息可得到所测细胞群中增殖细胞的数量。

2. 二维点图单参数直方图只能表明一个参数与细胞数量间的关系，不能显示两个独立参数与细胞数量的关系。当需要研究两个或更多测量参数之间的关系时，可采用二维点图。

二维点图有两种形式，横坐标表示前向散射光（FSC），反映细胞的大小；纵坐标表示侧向散射光，反映细胞内颗粒的大小和多少。坐标图上每一点同时表示具有相应坐标值的细抱存在。

例如，人血白细胞悬液样品上机后，在坐标图上根据细胞大小和细胞内颗粒形态出现三类不同颜色的细胞群，通过设门框把这三类细胞区分开，即红色显示淋巴细胞群（P1），绿色显示单核细胞群（P2），蓝色显示中性粒细胞群（P3）。如果欲检测其中一种细胞两个独立参数与细胞数量之间的关系，则选定其中一个门框。

假设选定淋巴细胞（P1），即可对其两种不同荧光素标记的细胞数量进行分析，出现第二种形式的二维点图。横坐标为PerCP-Cy5荧光标记的CD3细胞数目（荧光道数），纵坐标为FITC荧光标记的CD4细胞数目（荧光道数）。

因此，左上象限（Q1）代表CD4―细胞百分比，右上象限（Q2）代表CD4+/CD3-细胞百分比，左下象限（Q3）代表CD4―/CD3―细胞百分比，右下象限（Q4）代表CD3―细胞百分比。由此得知，在CD3+淋巴细胞中CD4―淋巴细胞所占的百分比。

双指标二维点囤的细胞群框定 荧光双染色二维点