RT-PCR 结果竟然不可信？这点你注意到了吗

每天驻扎在实验室做实验已经很不容易了，这时候有人泼凉水，猛得来一句：

你的基因表达计算结果准确吗？

「What？！你不是来搞事情的吧？我可是非常认真地对待实验的！有阴性对照、选取了常用的内参基因等等，实验结束之后，我没有做任何软件上的调整，直接导出结果进行统计计算的，整个流程上是没有问题的！」，也许你是这么想的，但是……

你有测过基因的扩增效率吗？也许你知道常用的基因表达计算方法——ΔCt 法，它在使用的时候，有一个必要条件需要满足：目的基因和内参基因的扩增效率要一致，并且尽可能地接近 100%。也就是说，如果不一致，有可能会影响基因表达计算结果的哟。

除了扩增效率外，还有 Ct 可信程度和内参基因的选择都有可能影响到计算结果的准确度。

所以，你的 Ct 值可信吗？

Ct 值是基因表达计算的基础数值，如果得到的 Ct 值不准确，有偏差，那么，计算的相对表达量毋庸置疑地也会有偏差。

你可能在想，「Ct 值不都是软件自动分析计算得到的吗？难道还会有不准确的？！」。

可以肯定地说，用软件分析扩增曲线得到的 Ct 值大多数情况下都是对的，然而，总有一些小例外需要我们注意，这时候，就需要我们清楚Ct 值的来龙去脉，然后，试一下基线+阈值线吧，会发现惊喜哦！