实验新手求救，太神奇了竟然跑不出来。。。

你的模版怎么保存的？一般这种情况考虑模版降解了

先从源头排除，模板什么时候提的？有没有降解可以跑胶看一下。引物设计有没有问题？看你的Tm值有点偏低，不知引物多长？下次设计引物时可以适当加长几个碱基，退火温度尽量不要太低，一般维持在55℃左右最佳，当然这个不绝对。还有酶和buffer的问题，这个最容易排除，比如全换新的，或者找一个你确定没问题的引物和模板做个对照，也能排除问题。至于跑胶的问题，这个更容易，看marker正不正常就行了。

可能是模板浓度过高或者过低，降解，或者是模板中杂质过多，或者是模板被污染（抑制剂，或者提DNA有东西没除干净，或者外来污染），或者是DNA没提好（片段被打碎，质量差等等），或者是反应条件不是最优条件，质量稍差的模板难扩出来。

可能是你的底物变性了，所以跑不出来。