融合蛋白没表达?别着急,可能只是你没测到
丁香园
初进实验室的小伙伴对新实验室的一切可能还有些陌生,见到师兄师姐实验一气呵成,结果一个比一个耀眼,羡慕不已。或许细心的你会发现,每位实验室牛人都有那么一两把用着顺手的枪,纤指轻捻就能转到自己想要的刻度;那个牌子的 Tris,pH 轻松调;可靠的载体,转一次就成;但好像合适的工具抗体不好找……
如今工具抗体品牌众多,比如如何在芸芸众生中挑选到适合自己的那个 「His」,就需要睁大眼睛仔细甄别:
此处有干货
Anti-His 标签抗体可以用来鉴定 His 标签融合蛋白的表达情况(如目的蛋白的相对表达量、分子量)、在细胞中的定位以及其它特性。但市场上的 Anti-His 标签抗体质量良莠不齐,为了挑选到优质的 Anti-His 标签抗体,在选购时,需要从以下 4 个方面考虑:
1. 抗体适用于哪些应用场景:产品的应用类型越多,在具体实验中的选择余地就越大。
2. 抗体克隆性——单克隆还是多克隆:单克隆抗体的特异性优于多克隆抗体,可避免使用多克隆抗体造成的非特异性反应。
3. 抗体制备来源——鼠源还是兔源:目前市场上的 Anti-His 标签抗体鼠源较多,也有部分兔源 Anti-His 标签抗体,可根据实验需要选择。
4. 抗体的效价高低:一个效价高的 100 μL Anti-His 标签抗体(假设其 WB 检测的推荐稀释比是 1:1 000,最终使用液相当于 100 mL),要比效价低的 200 μL Anti-His 标签抗体(假设 WB 检测的稀释比是 1:200,最终使用液相当于 40 mL)性价比更高。