备择 用GST融合蛋白
最新修订时间:
材料与仪器
全细胞抽提物
谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆 抗体 免疫共沉淀缓冲液 氯化钠 蛋白 A G-琼脂糖浆 2 × 样品缓冲液(用于 SDS-PAGE 胶)
20 ml 注射器和 18-G 针头 汉密尔顿注射器
谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆 抗体 免疫共沉淀缓冲液 氯化钠 蛋白 A G-琼脂糖浆 2 × 样品缓冲液(用于 SDS-PAGE 胶)
20 ml 注射器和 18-G 针头 汉密尔顿注射器
步骤
1. 按照蛋白 A/G-琼脂糖浆所述的方式准备两份样本(见「用蛋白A/G-琼脂糖」步骤 1),不加抗体。
2. 4℃ 下最大速度离心 10 min,沉淀非特异性聚集。转移上清到新的离心管中。
3. 加 30 μl 谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆(25~30 μl 珠子体积)。确保在加到样本中之前琼脂糖浆均匀悬浮。
4. 旋转样本,沉淀然后洗谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆,并且进行SDS- PAGE电泳和免疫印迹分析(见「用蛋白A/G-琼脂糖」步骤 5~10)。
来源:丁香实验