献给初学者：细胞虐我千百遍 我待细胞如初恋

细胞培养的过程大概是这样的：失败—成功—体味—收获—思考—交流，你到了哪个阶段？不妨和我们一起来看看丁香园上各位站友养细胞的那些事。

１. 心肌细胞培养体会

作者： windboy77

记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了， 换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题，大家都是公用的血清。

当时我很迷惑，后来我向老师如实反映问题，他听完我的叙述后想了想， 让我把培养基拿给他看，然后告诉我， 你的培养基颜色太深了，肯定偏碱，细胞在偏碱的情况下培养，耐受能力会逐渐下降，可能是产生脱壁现象的原因。

后来我重新测了一下培养基，为 7.5 左右， 我用灭菌的 HCL 调了一下， 培养基颜色变成淡红透亮。 再次培养， 发现细胞贴壁比较好了， 搏动效果也不错。 因此， 我以后每次培养前都要重新调好 PH 值， 我觉得很多因素是能影响 PH 值的， 这也算是实验的一点收获吧。

２. 低级错误浪费时间

作者： 冬日阳光

在做实验时经常会有一些低级错误的发生， 例如， 我在做细胞免疫组化时就发生了这样的一个错误： 我的细胞是养在 24 孔板里的， 细胞固定时我就直接加入了丙酮固定， 结果板子里面一片白白的， 这时才赶紧询问他人， 方知塑料制品会被丙酮所溶， 真是好笨。

另有一次， 我做细胞爬片时， 因为觉得盖玻片不好处理， 就自做主张地用了载玻片， 那可是我自己花钱去做的小玻片。

结果是虽然细胞长在了上面， 但是用荧光显微镜观察细胞染色情况时却怎么也看不清楚， 换用了盖玻片就好了。 结果被实验室主任训了一顿： 谁让你自做主张换玻片的？ 唉， 不仅花了钱， 浪费了时间， 白费了心血， 才得出这样的结论。

３. 昆虫细胞培养体会

作者： savid888

鄙人也算养了快一年的昆虫细胞了， 而且最近又在做昆虫血液的原代培养， 积累了点点经验， 说出来大家共勉。

首先， 要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍， 打造自己扎实的专业基础， 为以后的操作做准备。 这方面的书有很多，「体外培养的原理与技术」， 薛庆善主编， 科学出版社；「细胞实验指南」，D.L. 斯佩克特，ets 著， 黄培堂等译；「细胞培养」， 司徒镇强等。

其次， 每种细胞的培养条件都不相同， 别人的经验和书本上的 protocal 都只能作为参考， 真正重要的是自己培养过程中的不断摸索， 这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录， 随时总结。

再次， 培养要有极大的耐心， 过程中的影响因素又很多， 这又是细活， 其过程需要考虑各种影响因素， 当出现问题时一一加以排除， 找到最佳解决方案。 我在这里没有讨论细胞培养的细节问题， 因为那样的话是说不完的。

４. 如何防止细胞污染

作者： tangdl2000

我就怎样防止污染说说我的体会。 每个人都担心细胞被污染， 每个人都有碰到自己的细胞被污染。 起初我学习细胞培养的时候， 都是向师哥师姐学习， 基本上就是依葫芦画瓢。 随着时间的推移， 自己也就觉得有些步骤可以省略， 有些就要注意。

我个人认为比较重要的几点如下：

东西一定要用自己的。 既不要借别人的， 也不要借给别人。 可能大家觉得比较自私。 实际上还是很有好处的。 并不是每个人的操作都规范， 因此相互之间串着用， 很容易造成交叉污染。

我习惯口对口倒液体， 在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。 自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。 步骤越简单， 越能防止污染， 而且还能节省很多吸管。

一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。 不要做到半路， 又出工作间拿东西， 这样增加了污染的机会。

整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。 比如手机响了， 最好不要接。 我一般操作的时候将手机关了， 手机声音响起， 好烦躁。

我一般开紫外线照射台的时候， 就将培养基、酶、DTHANKS 液拿到室外让它自然升温。 这样 40 分钟后， 温度也升上来了。 有很多人将他放到 37 度水浴锅里加热。 一定要注意水浴锅的卫生， 有的常年不清洗， 里面很脏， 容易在外面瓶身上吸附大量细菌。 因此用它的也一定要勤换水。 从水浴锅拿出后， 最好找个毛巾插干上面的水。

操作前要洗手， 用 75%酒精搽手。

用完操作台， 要打扫卫生。

细胞要经常冻存， 我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。 细胞状态差了， 扔掉， 重新复苏。 这是一个必须养成的习惯。 毕竟很多情况下， 细胞并不是因为污染了， 才让你感到头痛。 这样你不会担心没有种子了。

我一般是不加双抗的， 只要注意， 不会污染。

５. 纤维细胞培养经验

作者： xiaoyuaizuguo

我曾经在自己制作的无细胞真皮上养过成纤维细胞， 无细胞真皮是按照文献的方法制作的， 把成纤维细胞接种到无细胞真皮上的方法也是按书和文献中的方法。 可是很奇怪， 成纤维细胞怎么都不长， 我重复了好多次， 结果都是失败。

后来又做了对照， 同样的条件， 一个平皿中直接接种成纤维细胞， 另一个平皿中放入无细胞真皮， 再接种成纤维细胞， 结果， 没有无细胞真皮的平皿中细胞长得很好。

这样说明不是细胞和平皿的问题， 那么问题在哪里呢？ 我苦思了很久， 觉得是不是无细胞真皮在处理的过程中用到了一些化学药品， 对细胞的生长有害。

可是在接种细胞以前我已经按文献上的方法将无细胞真皮用 DMEM 培养液浸泡了 48 小时， 在后来的实验中我就将浸泡的时间延长， 并在中间每天换浸泡液一次， 经过 5 天的浸泡以后， 成纤维细胞的接种最终成功了。

这份迟到的成功提醒我， 对于书和文献上的东西， 不能不信， 也不能全信， 很多东西还得靠自己在实验中摸索。

６. 悬浮细胞培养经验

作者： Liuhl

（１） 无菌操作是一切技术的基础， 切记此条。

（２）在细胞状态好时， 乘胜追击， 准备好一切所需要的细胞原料。

实验同时需要采用 FCM 检测药物干预后细胞周期的改变， 需要做 THC，Werstern Blot，RT－PCR 等时， 可以现将细胞处理好后， 根据不同的实验步骤， 保存细胞标本， 然后各个击破， 这样可以减少实验时间。

如要收集不同浓度点和时间点的标本， 细胞处理后， 部分用来做流式测周期 （固定那步可以放置 －２０ 度数日， 待标本收集全后一起检测）。 部分用来细胞涂片 （固定后， 可以放 -20 度数月， 本人曾放置 3 月没影响）。

部分用来做 Werstern Blot（将细胞离心呈粉末状置 -80 度保存， 或者提取蛋白变性后保存， 粉末保存时间可达 2 月）。 部分用于提取 RNA 时， 可现加上 Trizol 混匀后， 置 -80 度保存。

原料准备好后， 在根据自己的时间进行合理安排， 多出时间查阅文献。

（３）在进行每个实验时， 一定要找到该实验的详细的 Protocal， 一步一步踏踏实实的完成， 一般都会得到比较理想的结果。

怎么样？ 这些经验技巧你 get了吗？

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