原理
硫黄素 T (Thioflavin T) 是一种荧光染料，可以和富含 β 折叠的结构结合，例如 α-突触核蛋白原纤维。一旦结合，硫黄素T 的发射光谱就会发生红移 ，并且荧光强度会增强，这是一个很好的用来检测原纤维形成的测试。以下是用 α-突触核蛋白前体原纤维和单体做的硫黄素T 检测的操作指南。
材料与仪器
材料：硫黄素T、PBS、蒸馏水、0.2μm 注射器过滤器、96 多孔孔板
仪器：移液器、全波长荧光型酶标仪、震荡孵育器
步骤
1. 用蒸馏水制备 1mM 硫黄素T 储备溶液 (新鲜制备并使用 2μm 注射器过滤器过滤)。
2. 用 PBS pH7.4 稀释硫黄素T，确保每个孔中的硫黄素T最终浓度为 25μM (每孔溶液体积= 100μL). 孔板: 96 多孔孔板.
3. 在将要使用之前才把 alpha 突触核蛋白小份在室温下解冻。
4. 在相应的孔中加入 10μM 前体原纤维或者 100μM 单体 (或两者都有). 用移液器将孔中液体上下吸入排出混合. 浓度为估计值，需要优化来得到好的信号，并避免浪费。
5. 密封孔板然后置于震荡孵育器中 (600rpm)，37°C 孵育。
6. 用酶标仪读取荧光读数。
7. 再次密封孔板置于震荡孵育器下 37°C。
8. 在1 到 72 小时常规区间读数。
注意事项
全波长荧光型酶标仪设置参数:
温度: 37°C
读取形式: 孔板扫描
波长: 激发光 450 nm，发射光 485nm
PMT 增益: 自动
闪光每读: 6
震荡: 读数前 20 秒
来源：丁香实验
