α 突触核蛋白活体注射建模实验操作步骤

_______ uL 驴血清, _______ uL 10% TX-100

用 1X TBS (震荡, 室温) 冲洗切片 3 次。

用含 5% 驴血清的 TBS 制备一抗溶液，稀释度为 1：5000。用锡纸包好切片，和抗体一起在冷室中震荡培养过夜。

用 _______ mL TBS,

_______  uL 驴血清, _______ uL pSer129-α 突触核蛋白抗体

第二天:    (二抗, ABC 扩大信号, DAB 染色)

-用 1X TBST (震荡，室温) 冲洗切片 3 次. 余下的步骤中，需要一直将切片保留在锡纸里，即使是冲洗的步骤。

-用含 5% 驴血清的 TBS 制备二抗溶液，稀释度为 1：500。在冷室中培锡纸养盖好的切片 2 小时，震荡。

用 ______mL TBS,

 ______ uL 驴血清, _______ uL 生物素标记的驴抗兔 IgG

-用 1X TBST (震荡，室温) 冲洗切片3次。

-用 ABC 试剂培养切片 30 分钟 (震荡, 冷室) 。

-用 1X TBS 冲洗切片 3 次 (震荡，室温) 。

-用离心管和 ddH₂O制备 DAB 溶液，每 5 mL H₂O 加入如下溶液然后涡旋混合:

2 滴缓冲溶液

4 滴 DAB 溶液

2 滴双氧水溶液

注意: 所有接触过 DAB 的器具只能用来操作 DAB。我们还在通风橱内准备了一个 DAB 专用的废液缸。使用玻璃钩来处理DAB 溶液中的切片而不能用漆刷，并且操作后要用漂白剂冲洗玻璃钩。盛装过 DAB 的器皿都需要用漂白剂冲洗并且处理到生物性危害箱中。

-用注射器过滤到新的 6 孔板中。每一个需要染色的脑切片都用一个新的 DAB 孔。

-在DAB中培养每个切片直到变为浅棕色 (2-3 分钟就足够; 时间太长可能会造成背景染色太多)

-用 ddH₂O 冲洗 3 次

-在 1X TBS 中封片，然后在切片柜中干燥过夜。

第三天:    (脱水和盖玻片)