简介
角膜病是主要的致盲性眼病之一。炎症、外伤、变性、营养不良和肿瘤等均可导致角膜疾病的发生，其中感染性疾病最为多见，约 20% 的盲人是由眼部感染而失明的。造成角膜感染的病原微生物主要以细菌、病毒和真菌最为常见。采用小鼠角膜划痕法和紫外线 B 光照射法可以成功地制作出原发感染期、潜伏感染期和复发感染期的 HSK 模型。此建模操作具有方法简单、方便可靠，成模率高等特点。
用途
通过建立 HSK 动物模型来进行有关 HSK 的临床基础研究。
材料与仪器
实验对象：
小鼠。
实验器材：
刀片、吸管、裂隙灯显微镜、棉拭子。
实验试剂：
① 水合氯醛；
② DMEM 培养液；
③ 荧光素钠。
步骤
HSK 原发感染小鼠模型的基本过程可分为如下几步：
A. 用 10 g/L 水合氯醛（0.04 ml/10 g）腹腔注射麻醉小鼠，显微镜下用 11 号手术刀片背面尖端于角膜中央划痕呈「#」，以穿透角膜上皮达前弹力层为宜，再用吸管将 5 μl 含 2 × 106 空斑单位（plague forming unit, PFU）HSV-1 病毒的 DMEM 培养液滴于角膜表面，闭合眼睑后轻轻按摩 30 秒，以使病毒溶液充分接触角膜。
B. 于造模后次日连续 3 天，每天用 10 g/L 荧光素钠染色后在裂隙灯显微镜下观察角膜病变的发生情况，用棉拭子取角膜表面泪液接种 HEK293T 细胞检测有无病毒复制。
如病毒接种眼在接种后角膜出现点状、树枝状或地图状病灶，而且 HEK293T 细胞出现细胞病理学改变（cell pathological effects, CPE），即 HEK293T 细胞形态变大、变圆、呈葡萄状聚集，并使原来贴壁生长的细胞部分脱离漂浮在 DMEM 溶液中，则判定为 HSK 原发感染模型制作成功。
注意事项
小鼠在接种后的第 1～3 天全部出现上皮性结膜炎表现，首先表现为少量点状上皮浸润，继而整个上皮呈弥散性点状缺损，部分出现了树枝状、地图状浸润。接种后 7 天，角膜缘局部出现少量新生血管。
角膜擦拭液 HEK293T 细胞培养结果显示，HSV-1 接种动物均于培养后 24～72 小时 HEK293T 细胞出现 CPE 改变。
来源：丁香实验
