简介
抗原特异性细胞毒性 T 细胞的获得是用「反向遗传学」方法鉴定 CTL 表位的第一步。
材料与仪器
器材：
离心机，60Co 灯。
试剂：
① Ficoll-Paque 试剂；
② 100 IU/ml 的重组白细胞介素-2（IL-2 和 0.1 μg/ml 的抗 CD3 单抗等试剂。
步骤
从肿瘤浸润淋巴结、荷瘤机体或病毒感染后机体外周血分离、建立抗原特异性 CTL 细胞克隆的基本过程可分为如下几步：
① 采用 Ficoll-Paque 密度梯度离心获得淋巴结细胞或 PBMC 并进行体外培养；
② 每周用 60Co 照射后自体肿瘤细胞、自体 PBMC 或转染了相应抗原的细胞刺激一次并加入 100 IU/ml 的重组白细胞介素-2（IL-2）、0.1 μg/ml 的抗 CD3 单抗等每周刺激、增殖一次；
③ 2～3 次刺激、增殖后进行有限稀释，获得单细胞克隆；
④ 单细胞克隆经再次刺激、增殖后，通过细胞毒活性检测确定其抗原特异性，建立抗原特异性 CTL 细胞克隆。
采用相似的方法，可从抗原免疫后机体的淋巴结或外周血获得、建立抗原特异性 CTL 细胞克隆。
用于免疫的抗原可以是蛋白质抗原、编码抗原的重组载体等。此外，也可构建编码蛋白质抗原部分氨基酸序列的重组载体，用它们分别免疫机体后，通过检测是否诱导产生了抗原特异性 CTL，从而将 CTL 表位限定在抗原的某段氨基酸序列内，这样就可减少表位筛选时所需合成的多肽片段的种类和数量。
来源：丁香实验
