简介
吸附破伤风疫苗效价测定法是用破伤风毒素处理豚鼠，攻击后观察，根据第 5 日存活率的剂反应曲线与对照组的豚鼠进行比对，从而推断供试品效价的实验方法。
材料与仪器
试剂
① 胜理氯化钠溶液；
② 伤风类毒素标准品。
实验动物：
① 体重 14~ 16 g 清洁级 NIH 小鼠或 250~350 g 清洁级豚鼠。
步骤
吸附破伤风疫苗效价测定法的基本过程可分为如下几步：
A. 标准品溶液制备。
(1) 用胜理氯化钠溶液将破伤风类毒素标准品以适当比例稀释成 3~5 个稀释度。
(2) 居中的稀释度必须在攻后能保护约半数动物。
B. 供试品溶液制备。
(1) 胜理氯化钠溶液将供试品以适当比例稀释成 3~5 个稀释度。
(2) 居中的稀释度必须在攻毒后能保护约半数动物。
C. 动物选择。取一定数量的体重 14~16 g 清洁级 NIH 小鼠或 250~350 g 清洁级豚鼠。
D. 动物处置。
(1) 兔疫：每一稀释度的破伤风类毒素标准品溶液和供试品溶液分别免疫体重 14~16 g 同性别或雌雄各半的 NIH 小鼠至少 14 只 (或 250~350 g 豚鼠至少 10 只)
(2) 注射：给小鼠皮下注射 0.5 mL（或每只豚鼠皮下注射 1 mL）。另外 10 只未注射的小鼠作为对照 (或另外未注射的 5 只豚鼠作为对照)。
(3) 攻击：攻击用破伤风毒素使用 0.2% 明胶磷酸盐缓冲液稀释，免疫 4 周后，每只免疫小鼠皮下注射 50LD50 破伤风毒素 0.5 mL（或每只免疫豚鼠皮下注射 100 LD50 破伤风毒素 1.0 mL）。对照组每只小鼠皮下注射 1LD50破伤风毒素 0.5 mL（或对照组每只豚鼠注射 1LD50 破伤风毒素 1.0 mL）。
E. 观察攻击后观察 5 天，每日记录结果。根据第 5 日存活率的剂反应曲线，平行线法计算结果。95% 可信限应不大于效价的 50%~200%，否则 95% 可信限的低限应大干相应品种中要求的效价规格。
注意事项
A. 供试品的最低稀释度能保护半数以上动物。
B. 供试品的最高稀释度能保护半数以下动物。
C. 供试品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上的差异无显著意义。
D. 对照组动物应部分死亡而不全部死亡。具备以上条件则试验结果成立。
来源：丁香实验
