简介
特发性血小板减少性紫瘢兔模型,是用兔构建的特发性血小板减少性紫瘢(ITP)模型。
材料与仪器
器材:
注射器、采血针、EDTA-Na2 管等。
试剂:
①苯巴比妥钠;
②酸性枸橼酸右旋糖(acid citrate dextrose, ACD);
步骤
特发性血小板减少性紫瘢兔模型的基本过程可分为如下几步:
A. 采用新西兰白兔,雄雌均可,体面 2-4 kg;豚鼠,大于 3 月龄均可,雌雄不拘;
B. 豚鼠抗兔血小板血清的 (GP-APs) 制备用苯巴比妥钠 (30 mg/kg) 从耳缘静脉注射麻醉兔,按(V/V)从兔颈动脉取全血与酸性枸橼酸右旋糖 (acid citrate dextrose, ACD) 混合, pH 4.5,经离心,分离血小板并洗涤,用生理盐水稀释制成混悬液。用上述血小板混悬液 (109 个血小板)注入豚鼠腹腔,此后每 1 个月注射次,连续 2 次,共注射 3 次 (3 X 109 个血小板)。未次注射后的第 6 天,从豚鼠心脏穿刺取血,离心后取上层血清,随即分别用等量 1:1(V/V) 兔压紧红细胞和洗涤过的兔淋巴细胞各吸附血清一次,用生理盐水稀释,即为豚鼠抗兔血小板抗血清,分装后储存于 -70 °C 冰箱待用、按 ELISA 法和放射免疫沉淀法检测抗血清效价;
C. 兔 ITP 模型的建立:急性短期兔 ITP 模型:苯巴比妥钠麻醉兔,插入颈动脉套管后。耳缘静脉注射豚鼠抗兔血小板血清(根据抗血清效价与降血小板之间的量效关系.确定抗血清的注射量)。间隔 15 分钟、从颈动脉套管取全血注入装有 EDTA 的管内做血小板计数,在注射后的 90 分钟,再从颈动脉套管取血,置于装有 ACD 试管内,测定血小板结合的免疫球蛋白(PA IgG);
来源:丁香实验