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睾丸移植术(组织移植)

相关实验:单器官移植术

最新修订时间:

简介

睾丸移植术将自体异位睾丸或供者睾丸移植到阴囊里的一种手术。一般分为自体睾丸移植术与同种睾丸移植术。

材料与仪器

器材:


手术显微镜、显微手术器材、生物降温器、CO2 培养箱、光镜、电镜

试剂:

①戊巴比妥钠
②RPMI1640培养液
③Hanks液
④二甲亚砜
⑤小牛血清
⑥青霉素
⑧链霉素
⑨绒毛膜促性腺激素(HCC)

步骤

A. 术前准备


a. 动物准备:


选用雄性体重225-250 g 的成年大鼠作为受体,出生后1-3 天乳大鼠作为供体。以戊巴比妥钠100 mg/kg 腹腔麻醉受体大鼠后,切除双侧睾丸,15 天后自尾部采静脉血,测血清睾酮值。


b. 睾丸组织制备:取出生后1-3 天的大鼠在无菌条件下切除双侧睾丸,立即置入4 ℃ RPMI1640培养液中。用显微手术剪剪成1-2 mm3大小的睾丸组织块备用。


c. 冷冻保存复温培养


冷冻保存:将上述睾丸组织块置入4 ℃的Hanks液内漂洗两次,置入2 ml低温试管中,每管分装l只鼠的双侧睾丸组织块,加冷冻培养液1.5 ml(由培养液RPMI1640配制,内含1.4 mol/L 二甲亚砜、10% 小牛血清、青霉素100 U/ml,链霉素100 U/ml,pH7.2), 严密封口。


于4 ℃环境下静置30-45 分钟后,再置于生物降温器内按6-8 ℃/min速度降至0 ℃,再按0.4-0.6 ℃/min 速度降至-80 ℃,放入-80 ℃冰箱内保存。


复温与培养:


取冷冻保存的睾丸组织块,在40 ℃水浴槽内转动1 分钟快速复温,吸取试管内的组织块,于室温下置入Hanks液中洗涤3 次。将组织块置入盛有细胞培养液的培养瓶中,再置于充有5% CO2、95% 空气的CO2培养箱内,37 ℃恒温培养48-72小时。


B. 睾丸组织活性鉴定


a. 形态学观察,包括光镜和电镜。


b. 取冷冻保存培养48 小时的标本进行活性测定:分别测培养液中的新鲜睾丸组织和冷冻保存l个月及3个月的睾丸组织的睾酮值。睾酮释放试验:睾丸组织培养48 小时后更换培养液,再添加绒毛膜促性腺激素(HCC)25 U/ml 继续培养3-4小时,再测定培养液内的睾酮值。


C. 睾丸组织移植:


于受体后肢大腿内侧作一纵切口,将睾丸组织置入深浅肌膜之间,术后均不用免疫抑制剂。每只供体的两侧睾丸组织块移植于一个受体,移植后观察。

来源:丁香实验

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