简介
肺孢子虫是一种机会性病原体, 免疫功能低下的宿主感染后能引起肺孢子虫肺炎。此种情况主要见于 AIDS。 肿瘤放化疗及器官移植术后等免疫力低下的患者。PCP 成为此类患者重要的并发症和致死病因之一。大量的研究资料显示, 寄生于不同哺乳动物肺孢子虫的虫种不同, 其中感染人体的虫种已更名为 Pnetmocystis jiroreci(Pj)。 国内学者将之译为「耶氏肺孢子虫」。 感染鼠类的则为卡氏肺孢子虫。 由不同种肺孢子虫导致的疾病的英文缩写均为 PCP。
由于 PCP 临床表现的非典型性, 以及缺乏稳定, 可靠的体外培养系统, 目前动物模型仍然是研究肺孢子虫的基础条件。因为鼠的肺孢子虫与人的肺孢子虫在病原学形态, 病理学改变, 基因及抗原性方面存在着部分共性。 国内外多采用鼠作主要的实验动物。
原理
建模时给实验动物大鼠或小鼠使用兔疫抑制药物。
用途
已用于卡氏肺孢子虫的免疫学。 优势免疫抗原蛋白的鉴定及筛选, 药物的筛选和作用观察等。此外, 还可使用重度联合免疫缺损 (SCID) 小鼠作肺孢子虫模型。
材料与仪器
器材:大鼠、小鼠
试剂:
① 醋酸可的松
② 地塞米松
③ 环磷/酰胺
④ 苯丁酸氮芥
步骤
肺孢子虫动物模型的基本过程可分为如下几步:
A. 醋酸可的松︰大鼠 25 mg , 小鼠 1~2 mg 皮下注射, 每周 2 次, 连续 5~8 周。用药期间, 每周测体重 1~2 次。 作为实验动物对药物反应的指标。若体重增加 , 提示药量不足, 应适当增加药物剂量; 若体重下降过速, 则应减少剂量。
B. 地塞米松:作为免疫抑制剂, 大鼠每次每只最大用量不超过 6 mg, 小鼠不超过每只 0.8 mg。每次均按动物的实际体重给药, 即在实验过程中随着体重下降, 药量也随之减少, 避免了实验动物免疫力过度降低, 这样既保证了实验过程中动物有较高的感染率, 也获得了 100% 的存活率。
C. 环磷/酰胺:20~40 mg/kg 口服,3 次/周。
D. 苯丁酸氮芥:8~16 mg/kg 口服。3 次 1 周或氨甲蝶呤,0.4~0.8 mg/kg 口服。3 次/周, 同时加小剂量可的松。在使用上述药物的同时, 饮水中加四环素 (0.5~1.0 mg/ml) 或其他抗生素, 防止细菌感染。
注意事项
微量气管注射法。 超声雾化法感染免疫力低下的 BALB/C 小鼠的肺部感染率均为 100%(30/30)。 死亡率分别为 100% 10/10),33%(3/10)。小鼠肺部细菌感染 Ⅱ 2~24 小时后支气管周及肺泡间质内见中性粒细胞、淋巴细胞。 巨噬细胞为主的炎症细胞浸润。微量气管注射法感染小鼠部分肺泡组织结构崩解, 肺泡腔内可见脓肿形成及较多细菌集落。超声雾化法感染小鼠 24 小时可见肺部部分区域存在细胞变性, 但支气管及肺泡组织结构基本正常, 肺泡壁血管轻度扩张伴淤血。2-4-48 小时后可见支气管和支气管周围变性, 部分肺组织血管高度扩张, 伴有水肿,48 小时后炎症逐渐恢复。
来源:丁香实验