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在进行基因编辑时,构建同源重组质粒的目的是将Cas9和RNA引物导入到目标基因区域,然后在细胞内诱导DNA双链断裂,从而实现基因编辑。同源重组质粒通常由两个同源臂、Cas9和RNA引物等部分组成。
对于是否替换启动子,这通常取决于编辑目标基因的具体情况。如果目标基因的启动子和Cas9/RNA引物需要使用不同的启动子来驱动,那么就需要替换启动子。否则,如果目标基因的启动子可以与Cas9/RNA引物共用同一启动子,那么就可以不替换启动子,以减少构建同源重组质粒的复杂性。
总的来说,构建同源重组质粒是一个复杂的过程,需要考虑多种因素,如目标基因的具体情况、Cas9/RNA引物的设计、同源臂的长度和相似性等。
土井挞克树
要根据启动子的位置和上下游结构来选择是否替换,周围存在同源干扰的就要替换掉