吸入毒性试验

器材：

流量计（100L/h 或 250L/h）、分析天平、气相色谱、染毒装置等。

吸入毒性试验的基本过程可分为如下几步，以动式染毒为例：

A 取已在实验室环境至少适应 5 天的健康年轻动物，称重，然后在染毒装置中以设计的浓度染毒 4 小时。染毒期间应禁食。染毒过程中应进行染毒柜中气流流速、温度、湿度、受试物浓度、颗粒物粒度、分散度的测定，并保持上述因素稳定。

B 染毒步骤，将实验动物（10 只）放入染毒室内。密闭染毒室和毒物发生室，仅保持进、出气口和管道通畅。开启气泵和阀门，调整流量计，并测定进气流量，使之符合试验要求，记录开始时间。调整染毒室和毒物发生室的温度，以保证试验材料浓度的稳定。

C 观察并记录实验动物的反应。严密监视并注意控制整个动式染毒装置，随时加以调整，以保持试验条件染毒室内试验材料的浓度、气流速度和温度的稳定。

D 达到预定时间（4 小时）染毒结束时，让通风系统继续运转，以排出染毒室内的残留毒物。打开染毒室取出动物。

E 将阴性对照组小鼠放入染毒室内，开启气泵，使压缩空气通过无材料的毒物发生室进入染毒室。重复上述步骤。

F 测定可采用气相色谱或其他适当的分析技术测定染毒室内试验材料的浓度。也可采用称量法测定，即染毒前称量毒物发生室，染毒结束时再次称量毒物发生室，试验期间试验材料的重量损除以通过毒物发生室的空气体积（以 L 表示），即为试验期间染毒室内试验材料的浓度。

G 每次染毒后，仔细观察并作详细、系统的记录，记录动物死亡率，并观察存活动物的毒性反应，观察期限最少 7 天，但不做硬性规定。可依据毒性反应、体征发生的速度和恢复期长短而定。如有必要可适当延长观察时间。除在给毒当天需十分仔细观察毒性的效应外，以后每日均应定时认真观察。观察内容为皮毛变化，眼和黏膜、呼吸系统、循环系统、神经系统变化，特别是肢体活动和行为的改变。要注意有无震颤、惊厥、流涎、腹泻、嗜睡、昏睡等症状。中毒体征出现和消失的时间及死亡时间都十分重要，特别是在有死亡延迟趋势时。对这些应注意观察和记录。应分别在染毒前、染毒后（每周 1 次）、处死前称量动物体重。观察期间应采取措施使动物的损失减到最低。如发现死亡动物应及时解剖或冷冻，体弱或濒死动物应迅速隔离或处死。

H 病理学检查，所有实验动物皆应做大体解剖，应特别注意呼吸道的改变。对存活 24 小时的动物肉眼观察有病变的组织脏器及靶器官，并尽可能进一步做病理组织等检查。

1 使用 ICR 种小鼠或近交系小鼠，体重（22 ± 3）g。如须重复试验，必须使用第 2 种动物。可用体重 150～200 g 豚鼠或体重（200 ± 20）g 的 Wistar 大鼠 10 只。雌、雄各半。在一次试验中，动物之间或各组间的体重差异应不得超过实验动物体重平均值的±20%。

2 动物房的室温控制在（22 ± 3）℃，相对湿度 40%～70%。每个浓度组动物按性别分笼饲养，每笼动物数以不干扰动物个体活动及观察反应为度。动物房应具备良好的采光、通风设施。动物食用常规饲料，自由饮水。

3 分组与对照，将动物随机分配到试验组与对照组中，试验组至少分为高、中、低档浓度 3 组。对照组除不接触受试物外，其他条件应与试验组完全相同。必要时可设介质对照组，以研究介质的影响。

4 染毒装置可分为静式吸入染毒和动式吸入染毒两种方式，静式吸入染毒，把动物放在一定容积的密闭容器内，使受试物浓度较为稳定，使动物吸入染毒。为保证动物在染毒期间内有足够的氧气供应，应当根据实验动物的品、系、染毒时间和呼吸通气量等来确定染毒容器所需的体积。一般小鼠最低需气量为 4.35 L/h，大鼠为 30.5 L/h。动式吸入染毒系采用机械通风装置，连续地将新鲜空气与受试物按比例送入染毒柜，同时抽出等量的污染气体，使毒物浓度相对稳定。采用动式染毒时，染毒柜应每小时至少换气 3 次以上，以维持柜中氧气不低于 19% 和受试物浓度基本恒定，但气流速度不可过大。染毒柜内应稍呈负压，以防有毒空气外溢。每个染毒柜中放置的动物的总体积以不超过染毒柜总体积的 5% 为宜。