基因转染动物模型

​​α-突触核蛋白（SNCA）是最早发现与帕金森病（PD）存在关联的基因之一。在帕金森病中多巴胺能神经元不断受损，神经元内聚集了主要由 α-突触核蛋白构成的路易小体，最终导致了 PD 的临床持续病变。

基因转染动物模型是向动物注射编码 α-synuclein 的重组腺病毒载体，单纯过表达 α-synuclein 并不能百分百制备成功的帕金森动物模型，只能作为可行模型的一种。本方法重点在于展示脑立体定位注射，是做神经学研究的动物基础学习内容。

器材：

① 常用手术器械

② 缝合线

③ 立体定向仪

④ 微量注射器

⑤ 动物核磁共振检查

⑥ 手术器械包

试剂：

① 阿托品

② 氯胺酮

③ 佩托巴比妥钠

④ α-synuclein 的重组腺病毒载体

1、实验前先将动物头顶毛发剔除。

2、普通狨猴通过腹腔注射 0.3~0.5ml 阿托品进行麻醉，然后按照每公斤 10~12mg 氯胺酮和 15~20mg 佩托巴比妥钠的用量腹腔注射。

3、麻醉后通过动物核磁共振检查，最终确定每只实验猴黑质的立体定位。

4、将实验猴固定于立体定向仪，手术小心打开表皮，再根据大小尽量开出合适的骨窗。

5、将 29 号针头缓慢插入右侧黑质坐标点。

6、缓慢注射 5μl 编码 α-synuclein 的重组腺病毒载体（有条件用电控注射）。通常在 10min 内注射完，注射完后再保持针头不动防止针头带有病毒而造成泄露。

7、缝合伤口后预防饲养环境感染。

8、注射重组腺病毒后 16 周内，进行行为评估和实验研究。在 16 周后进行取材。

9、分别从蛋白质印迹、免疫组织化学检查和电子显微镜检查进行检测对应指标。

10、如组化和电镜结果可见神经元细胞肿胀、萎缩、核质碎裂等形态学变化，可观察到纹状体多巴胺神经元标志物酪氨酸羟化酶 (TH) 含量明显降低，尼氏染色可见黑质细胞减少等

1. 实验猴价格高，饲养条件高；建议学习对小鼠、大鼠的操作和进行课题设计。

2. 小鼠和大鼠脑定位有详细的参考书籍，上手难度比较低，同时可以选择更加简便的气体麻醉。