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热原试验

相关实验:全身毒性试验

最新修订时间:

简介

热原试验的目的是通过将一定剂量的供试品(包含材料浸提液)静脉注入家兔体内,在规定的时间内观察家兔体温升高的情况,以判定样品或样品浸提液中所含热原的限度是否符合规定。当前推荐采用家兔热原试验检验材料介导致热性,可测定宽范围的致热活性。

原理

热原试验的基本原理是将一定剂量的供试品(包含材料浸提液)静脉注入家兔体内,在规定的时间内观察家兔体温升高的情况,以判定样品或样品浸提液中所含热原的限度是否符合规定。

材料与仪器

器材:

微机热原测温仪(带电脑及热原测温程序)或肛温计、无热原注射器若干、电子秒表、试验兔固定装置、酒精棉球、干棉球、烘箱、120 ml 广口瓶等。

试剂:

① 凡士林

步骤

热原试验的基本过程可分为如下几步,以家兔为例:

A 热原试验要求供试验用的家兔健康合格,雌兔应无孕。预测体温前 7 日即应用同一饲料饲养,在此期间内体重应不减轻,精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未曾用于热原检查的家兔;或样品判定为符合规定,但组内升温达 0.6 ℃ 的家兔;或 3 周内未曾使用的家兔,均应在检查供试样品前 3~7 日预测体温,进行挑选。挑选试验的条件与检查供试样品时相同,但不注射药液,每隔 30 分钟测量体温 1 次,共测 8 次,8 次体温均在 38.0~39.6 ℃,且最高体温与最低体温相差不超过 0.4 ℃ 的家兔,方可供热原检查用。

B 用于热原检查后的家兔,如供试品判定为符合规定,至少应休息 48 小时方可再供热原检查用。如供试品判定为需要重复试验 1 次,不符合要求的家兔不再使用。如供试品判定为不符合规定,则组内全部家兔不再使用。每一家兔的使用次数,最多为 10 次。

C 给药方法和途径。家兔在试验前至少 1 小时开始停止给食并置于热原试验台上将家兔进行固定,直至试验完毕。在给药前 3 只家兔应标记、称量体重和测量体温。当日使用的 3 只家兔,试验前应分别测定家兔的体温 2 次,30 分钟测一次,每兔 2 次体温之差不超过 0.2 ℃,各兔正常体温应在 38.0~39.6 ℃,美国药典规定家兔体温最高不能超过 39.8 ℃,对体温下限则未作规定。且各兔间正常体温之差不得超过 1 ℃,以 2 次测温的平均值作为该兔的正常体温(基础体温)。在测定其正常体温后 15 分钟内,自耳缘静脉缓缓注入温热至 38 ℃ 的供试品溶液,注射剂量为 10 ml/kg。

D 注射完毕后,每隔 30 分钟测量家兔体温 1 次,共测 6 次,以 6 次体温中最高的 1 次减去正常体温,即为该兔体温的升高温度(℃)。《中国药典》规定如 3 只家兔中有 1 只体温升高 0.6 ℃ 或 0.6 ℃ 以上,或 3 只家兔体温升高均低于 0.6 ℃,但体温升高的总和达 1.4 ℃ 或 1.4 ℃ 以上,应另取 5 只家兔复试,检查方法同上。美国药典则规定每只动物体温升高不能超过 0.5 ℃。若超过 0.5 ℃,另取 5 只兔进行复试,合并 8 只兔温升之和不能超过 3.3 ℃。否则热原试验不合格。

注意事项

家兔体温变化十分灵敏,最易产生发热反应,发热反应典型、恒定。因此常选用家兔进行这方面的研究。使用远交系家兔(Oryctolagus cuniculus),对动物性别无特殊要求,注射样品或样品浸提液时的体重范围为 1.7~3.0 kg,至少适应环境 7 天,供试品初试时 3 只,复试时 5 只。家兔用于评价生物材料或材料浸提液的热原已有很长的历史,相关国际标准和国家标准均建议采用家兔耳缘静脉注射试验材料浸提液评价医用材料。

来源:丁香实验

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