简介
诱导性多潜能干细胞（iPS 细胞）是具有形成人和动物个体所有类型细胞的多向分化潜能并自我更新的一类细胞。iPS 细胞不仅可以表现为类 ES 细胞的特性，还避免了 ES 细胞的伦理道德问题，解决了多潜能性细胞的来源问题；避免了免疫排斥，为发育生物学以及组织器官构建的研究工作提供了模型；为研究特异性疾病的药物治疗提供了检测数据，对提高药物的效价、降低药物对机体的毒性等方面具有深远意义。
材料与仪器
器材：
① 移液枪、枪头
② Tip 头
③ 培养皿、24 孔板、96 孔板
④ 离心机、培养箱
试剂：
① 材料：293 细胞
② 促性腺激素
③ PBS、MEF 细胞培养基、DMEM
④ 胰酶、青霉素、链霉素、丝裂霉素-C
⑤ 液氮、乙醇、明胶
步骤
大鼠 iPS 细胞的制备的基本过程可分为如下几步：
一、含 4 种转录因子的病毒载体包装
1. 293 细胞培养：复苏 293 细胞，接种在 gelatin 包被的培养皿中，培养基为 DMEM 加 10% 血清。在 37 ℃，5% CO2 环境培养。待细胞密度达到 80%～90% 时传代。
2. 载体转染：将含 4 种转录因子的病毒载体转染到 293 细胞中，病毒在细胞内包装完成，48 小时后收集上清。上清超速离心，病毒颗粒沉淀用 MEF 细胞培养基重悬。
二、病毒感染大鼠成纤维细胞
1. 大鼠成纤维细胞培养：培养基为 DMEM 加 10% 血清。在 37 ℃，5% CO2 环境培养。当细胞培养至 3 代左右细胞状态较好时即可进行转染。
2. 感染过程：将大鼠成纤维细胞的原培养基吸去，加入含有病毒颗粒的大鼠成纤维细胞培养基，培养过夜。换新鲜无病毒大鼠成纤维细胞培养基。并在病毒感染 24 小时后，换大鼠胚胎干细胞培养基。
三、挑克隆，细胞培养
1.feeder 细胞准备：将新的 MEF 复苏传代于 24 孔板，当细胞密度达到 90% 时，用丝裂霉素 C 处理 4 小时，吸去培养基，用 PBS 洗 5 次。然后加入胚胎干细胞培养基。经转染的细胞每天更换胚胎干细胞培养基，直到 ES 样克隆长到足够大，开始挑克隆。吸去培养基，用 PBS 洗两遍。
2. 在显微镜下找到克隆，将 0.2～2 μl 的移液枪调到 2 μl，用 Tip 头刮下克隆，并将克隆吸到 96 孔板的孔里。向有单克隆 iPS 细胞的 96 孔板中加入 0.25% 的胰酶 20 μl，37 ℃ 消化 4 分钟，立即加入 ES 培养基 100 μl，终止消化。轻轻吹打 10 次后，将克隆转到有 feeder 的 24 孔板中继续培养。
来源：丁香实验
