简介
猪感染模型主可很明显地观察到志贺毒素导致的中枢神经系统紊乱和淋巴细胞凋亡等病理过程。能够很好地模拟 EHEC 引起的人休疾病、包括典型的 A/E 损伤和志贺毒素相关的效应。
原理
猪感染模型的原理是由于于猪肠迫正常菌群对 EHEC 定植的影响，所以通常用于 EHEC 感染模型的猪都为限菌的乳猪，以利于 EHEC 能够顺利定植。EHEC 定植千小肠，在定植部位扩增．引起宿主肠道上皮细胞典型的黏附/擦拭损伤，同时释放志贺毒素，引起细胞坏死和毒血症，导致乳猪腹泻、溶血尿毒综合征等症状。
用途
广泛应用于 EHEC 致病机制的研究，特别是 EHEC 介导的宿主上皮细胞 A/E 损伤的信号分子转导的研究。由其衍生的猪肠组织体外培养已经被公认为 A/E 损伤研究 ex vivo 模型的标准之一。此外，该模型还用于毒素的致病机制以及以毒素为靶点的治疗药物评价等方面。
材料与仪器
器材：新生乳猪，摇床
试剂：
① 链霉素溶液
② 无菌 PBS
③ LB 液体培养基
步骤
猪感染模型的基本过程可分为如下几步：
A. 动物准备：新生乳猪按在无菌条件下饲养至 3-5 天，感染前注意观察猪粪便的黏稠度和形状。
B. 细菌计数：将细菌接种到 LB 固体培养基上,37 ℃ 培养 18 小时。挑取单个菌落接种到 LB 液体培养基内， 37 ℃、150 r/min 摇床上培养过夜。取 100 μL 菌液接种千 10 ml LB 液体培养基内，37 ℃、150 r/min 摇床上培养，分别在 5 个不同的时间点取 1.5 ml 菌液，在入 = 600 nm 处测定其吸光度值。取 100 μL 菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，充分混匀后，内取 100μL 稀释后菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中，混匀，如此反复、最后按照 10 倍梯度倍比稀释至 1:100。从每管中各取 100 μL 稀释后的菌液加入到 LB 平板上，用无菌 L 玻棒涂抹均匀，放入 37 ℃ 孵箱内培养 18 小时后进行平板计数。最后根据光密度值和细菌浓度对数值 ( Ig ) 之间的对应关系求得线性回归方程。
C. 感染：口服灌胃方法给予每只乳猪 EHEC 菌 (1.0 - 1.5) X 1010 CFU。
D. 模型观察：口服细菌后可以观察猪排便情况，同时可对粪便中的细卤进行定量检测，观察 EHEC 对乳猪的定植情况。感染 3-5 天后，处死乳猪，取肠道进行 FAS 染色，透射电镜及扫描电镜等方法检测 A/E 损伤形成的情况。
来源：丁香实验
