简介
鸡作为 EHEC 感染模型的优势在于其对 EHEC 较为敏感, EHEC 很容易并可长时间定植于鸡的肠道,引发特异性的 A/E 损伤病理改变; 此外,廉价的成本也是此校型的优势。然而模型的缺点也很明显。其中最为突出的就是很难观察到与人感染相似的临床症状,即使在肠道有 A/E 损伤的发生此外,鸡也是 EHEC 的天然宿主。之一,对饲养环境要求较严格。
原理
鸡感染模型的基本原理是鸡同样是 EHEC 的天然宿主之一,可以作为 EHEC 感染模型的实验动物。EHEC 通过胃肠道感染鸡后,能稳定在鸡肠道定植并引起 A/E 损伤病理改变。
用途
鉴于此膜型的缺点,其应用受到很大的局限性。目前主要用于细菌毒素基因的筛选以及鸡用 EHEC 疫苗的评价等方面。
材料与仪器
器材:仔鸡,摇床
试剂:
① 链霉素溶液
② 无菌 PBS
③ LB 液体培养基
步骤
反刍动物感染模型的基本过程可分为如下几步:
A. 细菌制备:细菌计数:将细菌接种到 LB 固体培养基上,37 ℃ 培养 18 小时。挑取单个菌落接种到 LB 液体培养基内, 37 ℃、150 r/min 摇床上培养过夜。取 100 μL 菌液接种千 10 ml LB 液体培养基内,37 ℃、150 r/min 摇床上培养,分别在 5 个不同的时间点取 1.5 ml 菌液,在入 = 600nm 处测定其吸光度值。取 100 μL 菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中,充分混匀后,内取 100 μL 稀释后菌液加入到 900 μL 的无菌 PBS 中,混匀,如此反复、最后按照 10 倍梯度倍比稀释至 1:100。从每管中各取 100 μL 稀释后的菌液加入到 LB 平板上,用无菌 L 玻棒涂抹均匀,放入 37 ℃ 孵箱内培养 18 小时后进行平板计数。最后根据光密度值和细菌浓度对数值 ( Ig ) 之间的对应关系求得线性回归方程。
B. 鸡的准备:出生 1 天的仔鸡于 SPF 环境下分笼饲养。随时调整笼具大小以适应仔鸡的体型。
C. 攻毒:通过灌胃针 ( 20 g) 直接将 0.5 ml EHEC 细菌悬液 ( 1×105 CFU ) 给鸡灌胃.
D. 观察:由于 EHEC 很难引起鸡的临床表现及死亡等情况,所以在鸡的模型中主要以观察病例改变及粪便排菌情况为主。
来源:丁香实验